201779. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a deglukoteikoplanin karbonsavészter-származékainak és ezeket a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 201779 B és légköri nyomáson keverjük, argon atmoszférában, 12 órán át, majd a reakcióelegyet 1,5 liter éterbe öntjük, szilárd anyag válik ki, amelyet öszszegyűjtünk, éterrel mosunk és vákuumban szobahőmérsékleten egy éjjelen át szárítunk. 10 g, cím szerinti nyers észtert kapunk. Ezt a terméket 150 ml metanolban oldjuk és erőteljes keverés közben 300 ml vizet és 300 ml etilacetátot és 300 ml 1:2 (térf./térf.) n-butanol:víz elegyet adagolunk. A vizes réteg pH-ját 3,5-re állítjuk be és a szerves fázist elkülönítjük. A vizes fázist kétszer extraháljuk 600- 600 ml etilacetáttal. A szerves rétegeket egyesítjük, 400 ml vízzel mossuk és vákuumban kis térfogatra töményítjük be. Éter hozzáadására szilárd anyag válik ki, amelyet összegyűjtünk, éterrel mosunk és vákuumban szobahőmérsékleten egy éjjelen át szárítunk. 6,1 g nyers deglukoteikoplenin-benzilészter-hidrokloridot kapunk. Elemzési eredmények: deglukoteikoplanin-benzilészter-hidroklorid 75%, víz és oldószerek 15%, nem azonosított szennyezések 10%. B) A deglukoteikoplanin-benzilészter tisztítása szilikagél oszlopkromatográfiával 10 g szilikagél 60-at (0,06-0,1 mm, Merck) adunk 2,5 g nyers deglukoteikoplanin-benzilészter (titer: 65%) 100 ml 90%-os vizes metanollal elkészített oldatához. Az oldószert vákuumban teljesen ledesztilláljuk és a maradékot felvisszük egy kromatográfiás oszlopra, amely acetonitrilben szuszpendálva 250 g sziUkagélt tartalmaz. Az oszlopot úgy fejlesztjük ki, hogy egymás után 25 a következő oldószer-elegyeket alkalmasuk: ch3cn 250 ml 97:3 (térf./térf.)CH3CN: :H20 500 ml 94:6 (térf/térf.) CH3CN:H20 500 ml Az eluátumokat elvetjük, majd az oszlopot lineáris grádiens (acetonitril vízben) alkalmazásával eluáljuk oly módon, hogy 200 ml/óra sebességgel 1,5-1,5 liter 94:6 (térf./térf.) CH3CN:H20 elegyet és 70:30 (térfi/térf.) CH3CN:H20 elegyet keverünk össze. 25 ml-es frakciókat szedünk és ezeket HPLC-vel vizsgáljuk. A deglukoteikoplanin-benzilésztert tartalmazó frakciókat egyesítjük (700 ml), 250 ml n-butanolos 0,05 mól sósavat adunk hozzá és az oldószereket kb. 30 ml végtérfogat eléréséig ledesztilláljuk. 300 ml éter hozzáadására szilárd anyag válik ki, amelyet összegyűjtünk, éterrel mosunk és vákuumban 40 °C-on 48 órán át szárítunk. 1,6 g lényegében tiszta deglukoteikoplanin-benzilészter-hidrokloridot kapunk. Lényegében a 3.a) példa szerinti eljárást követve, de kiinduási anyagként az L17046 antibiotikum helyett teikoplanint, teikoplanin A2 2. komponenst, deglukoteikoplanint vagy L 17054 antibiotikumot használva ugyanezt a cím szerinti vegyületet kapjuk, hasonló kitermeléssel (a reagensekből ugyanazokat a moláris mennyiségeket alkalmazva, mint az előbbi példában). A cím szerinti vegyületet úgy is előállíthatjuk, hogy teikoplanin A2 2. komponensből, L 17046 antibiotikumból vagy deglukoteikoplaninból indulunk ki és lényegében a 3.b) vagy c) példa szerinti eljárást követjük. Lényegében az előbbiekkel azonos kitermeléseket érhetjük el. 4. példa N-benziloxikarbonil-deglukoteikoplanin (NCBZ-deglukoteikoplanin) k0,45 ml klórhangyasav-benzilésztet 10 ml acetonban oldunk és az oldatot csepegtetve hozzáadjuk egy olyan oldathoz, keverés közben, amely 2,5 g deglukoteikoplanint és 0,5 g nátrium-hidrogénkarbonátot tartalmaz 150 ml 1:2 (térf./térf.) vfeaceton elegyben. Az adagolást 0-3 °C-on végezzük. 30 perc elteltével 500 ml vizet adunk hozzá és a kapott oldatot 500 ml etiléterrel extraháljuk A szerves réteget elvetjük, míg a vizes fázis pH-ját 1 n HCl-lel 3,5-re állítjuk be és 600 ml 2:1 (térf./térf.) etilacetát:n-butanol eleggyel extraháljuk. A szerves réteget elkülönítjük, 200 ml vízzel mossuk, majd csökkentett nyomáson kis térfogatra töményítjük be. Etiléter hozzáadására szilárd anyag válik la, amelyet összegyűjtünk, éterrel mosunk és vákuumban egy éjjelen át 40 °C-on szárítunk. 2,7 g lényegében tiszta N-benziloxi-karbonil-deglukoteikoplanint kapunk. 5. példa N-benziloxikarbonil-deglukoteikoplanin-pival oiloximetilészter 0,7 g N-benziloxikarbonil-deglukoteikoplanint 20 ml dimetilformamidban oldunk és az oldathoz keverés közben, szobahőmérsékleten hozzáadunk 0,1 ml trietilamint (TEA), 0,1 ml klórmetil-pivalátot és 35 mg nátriumjodidot. A reakcióelegyet 4 órán át 45 °C-on tartjuk, majd további 0,1 ml TEA-t és 0,15 ml klórmetil-pivalátot adagolunk. Ezt a keveréket kb. 4 órán át 45 °C-on, majd egy éjjelen át szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután további 0,1 ml TEA-t és 0,1 ml klórmetil-pivalátot adagolunk. Ezt az elegyet kb. 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd erőteljes keverés közben 400 ml étert adunk hozzá. A kiváló olajos vegyületet 200 ml 1:9 (térf./térf.) aceton:éter eleggyel kezeljük, majd összegyűjtjük, éterrel mossuk és egy éjjelen át vákkuumban, szobahőmérsékleten szárítjuk. 0,72 g nyers N-benziloxikarbonil-deglukoteikoplanin-pivaloiloximetilésztert kapunk. Ez a termék eléggé tiszta ahhoz, hogy a védőcsoport-eltávolítási műveletnek vethessük alá. Az I—III. táblázatban mutatjuk be egy olyan minta elemzési eredményeit, amelyet szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítottunk, az eluálást 95:5- 50:50 (térf./térf.) metilénklorid:metanol lineáris grádiense alkalmazásával végezve. 6. példa Deglukoteikoplanin-pivaloiloximetilészter a) 1,6 g nyers N-benziloxikarbonil-deglukoteikoplanin-pivaloiloximetilésztert — amelyet az 5. példa szerint állítottunk elő — 400 ml metanolban oldunk és az oldathoz l,2g5%-os palládium/szenet adagolunk. A kapott szuszpenziót szobahőmérsékleten légköri nyomáson hidrogenolízisnek vetjük alá. 30 perc alatt kb. 96 ml hidrogén abszorbeálódik. A reakció ezzel befejeződik. A katalizátort kiszűrjük, 600 ml 8:2 (térf./térf.) metanol:0,l n HC1 eleggyel mossuk és elvetjük. Az egyesített szűrlet-26 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
