201779. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a deglukoteikoplanin karbonsavészter-származékainak és ezeket a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HL) 201779 B nos terjedelme vonatkozásában. A kiindulási vegyiiletek előállítása a) Az L 17054 antibiotikum előállítása 5 g teikoplanint erőteljes keverés közben hozzáadunk 60 ml 0,5n vizes sósavhoz, amelyet 80 °C-ra előmelegítettünk. A kevertetést folytatjuk és a hőmérsékletet 30 percen át kb. 80 °C-on tartjuk. Ezután a keveréket gyorsan szűrjük, a szűrletet 0-5 °C-ra hűtjük le és 10 ml 6n sósavat adunk hozzá. A kapott szuszpenziót kb. 15 percen át keverjük, miközben a hőmérsékletet 0-5 °C-on tartjuk. A csapadékot összegyűjtjük, 20 ml hideg ín HCl-lel, majd etiléterrel mossuk és csökkentett nyomáson szobahőmérsékleten szárítjuk. így a nyers L17054 antibiotikum hidrokloridjához jutunk (4,5 g). 3 g, az előbbiek szerint előállított nyers L17054 antibiotikum-hidrokloridot 95:5 (térfVtérf.) 0,2%os vizes HCOONH4/CH3-CN elegyében (150 ml) szuszpendálunk. A pH-t In NaOH-val kb. 7,5-re állítjuk be és a terméket feloldjuk. A kapott oldatot felvisszük egy oszlopra, amely 150 g 0,06-0,2 nm-es szilanizált szilikagélt (Merck) tartalmaz, ugyanebben az oldószer-elegyben. Az oszlopot lineáris grádiens elucióval fejlesztjük ki, 5-21%-os acetonitrilkoncentráció alkalmazása mellett 0,2%-os vizes ammóniumformiátban (térf./térf.). 20 ml-es frakciókat szedünk, amelyeket HPLC-vel követünk. Egyesítjük az L 17054 antibiotikumot tartalmazó frakciókat (70-96.) és az acetonitrilt vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó vizes oldatot felviszszük egy oszlopra, amely 10 g szilanizált szilikagélt tartalmaz desztillált vízben. Az oszlopot a sók teljes eltávolításáig desztillált vízzel mossuk, majd a terméket 1:1 (térfytérf.) CH3CN:H20 eleggyel eluáljuk. Az egyesített oldatot vákuumban betöményítjük, kis térfogatra, és az antibiotikumot aceton hozzáadásával kicsapjuk. Szobahőmérsékleten való szárítás után 0,9 g lényegében tiszta L17054 antibiotikumot kapunk. b) AzL 17046 antibiotikum előállítása 10 g teikoplanint kevertetés közben hozzáadunk 150 ml 80 °C-ra előmelegített In sósavhoz. Kb. 45 perc múlva a reakcióelegyet 0-5 #C-ra hűtjük le és hozzáadunk kb. 30 ml sósavat. A keverést kb. 10 percen át folytatjuk, majd a kivált csapadékot szűréssel kinyerjük, 20 ml 2n HCl-lel, majd etiléterrel mossuk és egy éjjelen át káliumhidroxid pelletek fölött szobahőmérsékleten szárítjuk. 8,3 g nyers L17046 antibiotikum-hidrokloridot kapunk. 6,2 g előbbi nyers terméket 500 ml 80%-os metanolban oldunk és az oldathoz hozzáadunk 30 g szilikagélt (Merck; 0,06-0,2 mm). 200 ml n-butanol hozzáadása után az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot ezután felvisszük egy kromatográfiás oszlopra, amely 300 g szilikagélt tartalmaz acetonitrilben. Az oszlopot úgy fejlesztjük ki, hogy egymás után 300-300 ml-t veszünk a következő oldószerclegyekből: acetonitril, 95:5 acetonitrihvíz, 90:10 acetonitrihvíz, 85:15 acetonitrihvíz. Az eluátumokat elvetjük és az oszlopot lineáris grádiens elucióval fejlesztjük ki, 3,5-3,5 liter összekeverésével a következő oldószerekből: 83:17 acetonitrihvíz és 70-30 acetonitrihvíz, 375 ml/óra sebességgel. 21 25 ml-es frakciókat szedünk és ezeket HPLC-vel vizsgáljuk. Az L 17046 antibiotikumot tartalmazó frakciókat (170-200.) egyesítjük. 400 ml n-butanolt adunk az egyesített frakciókhoz és a kapott elegyet kis térfogatra töményítjük be. A zavaros oldathoz acetont adunk és 10 °C-ra való lehűtés után csapadék képződése indul meg. Megfelelő idő elteltével a kicsapódás teljessé válik és ekkor a szilárd anyagot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk, majd éteres mosást végzüink, és vákuumban szobahőmérsékleten szárítjuk. A cím szerinti vegyületet kapjuk, lényegében tiszta alakban (1,9 g). c) a deglukoteikoplanin előállítása 10 g teikoplanint 250 ml 90%-os vizes trifluorecetsavban oldunk és az oldatot kb. 2 órán át kb. 80 °C-on tartjuk. Szobahőmérsékletre való lehűtés után a reakcióelegyet 1 liter jéghideg etiléterbe öntjük. A kapott csapadékot szűréssel összegyűjtjük, etiléterrel mossuk és levegőn szárítjuk. 6,3 g nyers deglukoteikoplanin-trifluoracetátot kapunk. 5,3 g ilyen nyers anyagot feloldunk 1 liter 1:2:3 0,2%-os ammóniumformiát:metanol:n-butanol elegyben és az oldathoz hozzáadunk 20 g szilanizált szilikagélt (Merck, 60, 0,06-0,2 mm). Megfelelő keverés után az oldószerekét vákuumban sztrippeléssel eltávolítjuk és a maradékot felvisszük egy kromatográfiás oszlop tetejére, amelyet 750 g szilanizált szilikagéllel (0,06-0,2 mm, Merck), vízben, állítunk elő. Az oszlopot 9:1 0,6%-os vizes HCOONH4:CH3CN eleggyel fejlesztjük ki. Az eluátumot elvetjük, majd az eluálást lineáris grádienssel folytatjuk (l:9-3:7 acetonitrihvíz), 200 ml/óra áramlási sebességgel, kb. 30 órán át. 25 ml-es frakciókat szedünk és ezeket HPLC-vel követjük. A deglukoteikoplanint tartalmazó frakciókat (200-250.) összeöntjük és az elegyhez n-butanolt adunk. Keverés után az elegyet kis térfogatra töményítjük be, etilétert adunk hozzá és a kicsapódó szilárd anyagot szűréssel összegyűjtjük, etiléterrel mossuk és 40 °C-on vákuumban szárítjuk. 0,9 g lényegében tiszta deglukoteikoplanin antibiotikumot kapunk, d) A teikoplanin előállítása A teikoplanint az Actinoplanes teichomyceticus ATCC 331121 törzs tenyésztésével állítjuk elő, a 4.239.751. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint és SephadexR oszlopkromatográfiával vagy más, egyenértékű tisztítási technikával tisztítjuk. 1. példa A deglukoteikoplanin antibiotikum n-butilészter-hidrokloridjának előállítása a) L17046 antibiotikumból 1,75 g L 17046 antibiotikumot 56 ml n-butanolban oldunk. Az oldathoz keverés közben, szobahőmérsékleten 4,5 ml butanolos 6,5 mól sósavat adunk. A reakcióelegyet 60-65 °C-ra melegítjük fel és 12 órán át keverjük. A keletkező tiszta oldatot egy éjjelen át szobahőmérsékleten tartjuk, majd vákuumban kis térfogatra (kb. 30 ml) töményítjük be. 200 ml vizet adunk a maradékhoz és a kapott keveréket 200 ml etilacetáttal extraháljuk. A szer22 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
