201775. lajstromszámú szabadalom • Eljárás interferon tisztítására
HU 201775 B vagy p-Gln lehet. A GIF143 polipeptidet kódoló, következő DNS szekvenciájú DNS fragmentumot a kívánt plazmid vektor szerkesztésére lehet felhasználni: GAG GAC CCA TAG GTG AAG GAA GCT GAAAAC GTC CTG GGT ATG CAC TTC CTT CGA CTTTTG CTG AAG AAA TAC TTC AAC GCT GGT CATTCT GAC TTC TTT ATG AAG TTG CGA CCA GTA AGA GAC GTT GCT GAC AAC GGT ACT CTG TTC CTG CTG CAA CGA CTG TTG CCA TGA GAC AAG GAC GGT ATC CTG AAA AAC TGG AAA GAA GAATCT CCA TAG GAC TTT TTG ACC TTT CTT CTT AGA GAC CGT AAA ATC ATG CAG TCT CAG ATC GTT AGA AAG ATG AAG TTC GAC AAG TTT TTG AAG AAG GAC GAC CAG TCT ATC CAG AAA TCT GTT TTC CTG CTG GTC AGA TAG GTC TTT AGA CAA GAA ACT ATC AAG GAA GAC ATG AAC GTT AAG CTT TGA TAG TTC CTT CTG TAC TTG CAA TTC TTC TTC AAC TCT AAC AAG AAA AAG CGT GAC AAG AAG TTG AGA TTG TTC TTT TTC GCACTG GAC TTC GAA AAG CTT ACT AAG TAC TCT GTT CTG AAG CTT TTC GAA TGA TTG ATG AGA CAA ACT GAC CTT AAT GTA CAG CGT AAA GCT ATC TGA CTG GAA TTA CAT GTC GCA TTT CGA TAG CAT GAA CTG ATC CAG GTT ATG GCT GAA CTG CTA CTT GAC TAG GTC CAA TAC CGA CTT GAC TCC CCG GCT AAA ACT GGT AAG CGT AAA AGG GGC CGA CGA TTT TGA CCA TTC GCA TTT 7 AGA TCT CAG ATG CTG TTC CGT GGT CGT CGT TCT AGA GTC TAC GAC AAG GCA CCA GCA GCA GCT TCT CAG TAA CGA AGA GTC ATT Az alábbiakban ismertetjük az ábrákat: Az 1. ábra a pIN5T4N143 plazmid vektor szerkesztési sémáját ábrázolja. A vektorral Escherichia coli sejteket transzformálunk GIF143 termelése céljából, amelyet a jelen találmány szerint tisztítunk. A 2. ábrán folyamat ábra látható, amely a gamma interferon tisztítási eljárásának a jelen találmány szerinti előnyös kiviteli módját mutatjuk be. A 3. ábra szeintén folyamat ábra, amelyben ennek a tisztítási eljárásnak egy még előnyösebb megvalósítási módja szerepel és amely elsődlegesen a kromatográfiás tisztítási módszereket foglalja magába. A 4. ábra a jelen találmánynak egy különösen előnyös kiviteli módját mutatja be folyamat ábrán keresztül. Az 5. ábrán fénykép látható, amin egy SDS-PAGE protein sávjait látjuk. Ezt úgy kaptuk, hogy különböző koncentrációjú cink-kloridot tartalmazó puffer oldatban feltárjuk a W3110/pIN5T4N14ő sejteket és a felülúszót SDS-PAGE vizsgálatnak vetjük alá. A 6. ábra fénykép, amin egy SDS-PAGE protein sávjait mutatjuk be, itt a cink-klorid helyett rézszulfátot használtunk. A 7. ábra fénykép, ezen egy SDS-PAGE protein sávjai láthatók, amelyeket úgy kaptunk, hogy különbözhő koncentrációjú cink-kloridot tartalmazó puffer oldatban feltárjuk a W3110/pIN5T4N143 sejteket és elvégezzük a felülúszó SDS-PAGE analízisét. A termelés menetét az 1. ábra magyarázza. A pGIF54 plazmidot — amely lényegében megegyezik a 201995/1983. számú japán közrebocsátási iratban szereplő pGIF4 plazmiddal (FERM BP-282 — AatlI-vel és BglII-vel emésztjük és a kapott DNS fragmentumot a továbbiakban Avall-vel kezeljük, miáltal egy AcalI-BglII DNS fragmentumhoz jutunk, s ezt az 1. ábrán bemutatjuk. Ezután a kívánt pIN5T4N143 plazmidot úgy kapjuk meg, hogy DNS ligáz jelenlétében az 5’-AATTCATGCAG-3’ 3’-GTACGTCCTG-5’ képletű szintetikus dns linkért beépítjük a fenti AvalI-BglII fragmentum Avail helye és egy hosszabb, tetraciklín rezisztencia gént (Te1) hordozó DNS fragmentum EcoRI helye közé. (Ez utóbbi fragmentumot úgy kapjuk, hogy a pIN5T4 plazmidot, amely a 0.143.673. számú európai közrebocsátási iratban szerepel, BglII-vel és EcoRI-vel kezeljük). A keletkező plazmid egy olyan gént tartalmaz, ami a GIF143 polipeptidet kódolja. Ez a polipeptid olyan, mint a GIF146, azonban N-terminális részéről 3 aminosav csoportot, a Cys-Tyr-Cys csoportot eltávolítottunk. Ezután E. coli W3110 sejteket transzformálunk a plazmiddal hagyományos mó-8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
