201771. lajstromszámú szabadalom • Eljárás amikacin előállítására
HU 201771 B A halálozási arány, toxikusság és akut általános tolerancia szempontjából összehasonlító kísérleteket végeztünk a Bristol Myers piacon kapható terméke (BB-K8) és a találmány szerinti szintézissel előállított amikacin között, valamint a lehetséges szennyezők között (BB Kll, BBK29 és L-HABA- val, előnyösen az L-(-)-4-benziloxi-karbonil-amino-2-hidroxi-vajsav N-hidroxi-szukcinimid-észtere, N-l- és N-3”-helyzetben képzett diacilát), egerek tizes csoportjain, intravénás adagolással (farkvégi vénába). Az LD50 értékeket a Finney-Probits módszerrel számítottuk. Az eredmények a következők: 5 LD50 5% megbízható(mg/kg) sági határok BB-K8 Bristol 202,3 (170-228) Amikacin 241 (241-271) BB-K29 126 (119-134) BB-K11 356 (264-480) Diacilát (N-l és N-3”) 268 (247-290) A fenti adatok kétségtelenül a találmány szerinti szintetizálási eljárás fölényét mutatják, mivel olyan végtermékeket kapunk, amelyeknél az esetleges szennyezők, bár kis mennyiségben jelen vannak, kevésbé toxikusak, mint az egyéb szintetizálási eljárásoknál előforduló BB K29. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon ismertetjük anélkül azonban, hogy csak ezekre korlátoznánk. 5. példa 53,4 g (TV) képletű közbenső terméket 1000 ml vízben szuszpendálunk és 38,5 ml ecetsavval feloldjuk; szobahőmérsékleten 30 percig történő keverés után a pH-értéket 6-ra állítjuk be 30% NaOH-val (kb. 52 ml). További 30 perc után szobahőmérsékleten, 1442 ml metilén-kloridban oldott 34,9 g N-benziloxi-ka»bonÍl-L-HABA-N-hidroxi-szukcinimidet adagolunk egyszerre. As elegyet ezután egy éjszakán át erőteljesen keverjük szobahőmérsékleten, majd a szerves oldószert 40 °C-nál alacsonyabb hőmérsékleten ledesztilláljuk, a pH-értéket ecetsavval 4,2-re állítjuk be. A három benzil-oxi-karbonil-védőcsoportot hagyományos eljárással távolítjuk el úgy, hogy az oldathoz 50 g 2,5%-os Pd/C-t adagolunk, majd szobahőmérsékleten hozzácsepegtetünk 50 ml hangyasavat. A szén dekaliton való átszűrése és vízzel való mosása után 1900 ml dús vizet kapunk, a következő összetétellel: amikacin 11,52 g/1 kanamicin-A 2 g/1 BB-K110,25 g/1 di (HABA) KANA 1,3 g/1 ami 65%-os sztöchiometrikus amikacin-hozamnak falei meg, a (IV) diacilátból kiindulva. Az.oldatot Zerolit típusú ioncserélő gyantán abszorbeáljuk (ROHM és HAAS védjegy), gyengén savas formában, miután a pH-t 7,5-re állítottuk be. A kanamicint lineáris ammónia gradienssel 0,5 N-ről 1,5 N-re eluáljuk, az oszlopból ez távozik először, majd az amikacin. A 300-350 részpárlatokat összegyűjtjük és vákuum alatt töményítjük, hogy az ammóniát teljesen eltávolítsuk és 20%-os végső amikacin-koncentrációt érjünk el. 50% tömeg/térfogat H2S04-et használunk a savazáshoz 1,5 pH-értéknél, majd karbonkezelés következik. 30 perces, szobahőmérsékleten való keverés után a szenet átszűrjük, a maradékot mossuk és az amikacin-diszulfátot metanollal kicsapatjuk. A 2 órás, szobahőmérsékleten való keverés után kapott fehér, szilárd anyagot átszűijük, mosás és 45 °C-on, 16 órán át vákuum alatt történő szárítás után a tömeg 33,3 g. Az amikacin bázis HPLC-vel meghatározott koncentrációja 68% (690 pg/mg mikrobiológiai titrálással), a többi adat megegyezik az amikacin-szulfátéval. 2. példa 50 g (IV) képletű 3,6’-N-benzil-oxi-karbonil-kanamicin-A-t, amely a HPLC elemzés szerint 89,5%-os (59,3 mmól), víztartalma 3,3%, fő szennyezője l,2,6’-tri-N-benzil-oxi-karbonil-kanamicin-A, 1500 ml deionizált vízben szuszpendálunk. 30 percig tartó keverés után annyi jégecetet adagolunk hozzá, amennyi 6 ± 0,2 pH-érték eléréséhez szükséges. Ekkor gyakorlatilag oldat jön létre. Szobahőmérsékleten hozzáadjuk az L-(-)--y-benzil-oxi-karbonil-amino-a-hidroxi-vajsav— N-hidroxi-szukcinimid aktív észterét, metilén-klorid oldatként (25 g, azaz 80,6 mmól) 1000 ml oldószerben. Az elegyet igen erőteljesen keverjük kb. 2 órán át, majd folytatjuk a keverést egész éjjel. A szerves fázis leválasztása után a pH-t 3N NH3 oldattal 10-re szabályozzuk. Az így képződött fehér csapadékot Büchner-tölcséren vákuum alatt átszűrjük és vízzel mossuk. Az enyhén kristályos anyagot vákuum alatt 30 C-on kb. 30 órán át szárítjuk. Az így kapott 30,9 g (VI) 3,6’-di-N-benzil-oxi-karbonil-l-N-L-(-)-7- benzil-oxi-karbonil-amino-alfa-hidroxi-butiril-ka namicin-A koncentrációja 70% (HPLC). Fő tényezők: (IV) kiinduló diacilát 1% triacilát (N-l, N-3 és N-6’-helyzetben benziloxi-karbonil-csoportokkal): 2% szárítási veszteség: 4,5% (3 óra, 105 °C) kénhamu: 0,15%. 3. példa 53,4 g (IV) képletű köztiterméket — HPLC-vel 89,5%-os tisztaság, 63,4 mmól — 1000 ml vízben szuszpendálunk és 38,5 ml ecetsavval oldatba viszünk. 30 perces, szobahőmérsékleten végzett kevertetés után a pH-t a következő Táblázatban jelzett pH-értékre állítj uk be, 30%-os NaOH-oldattal. további 30 perces, szobahőmérsékleten végzett kevertetés után egyszerre hozzáadunk 34,9 g N- benziloxi-karbonil-L-HABA-N-hidroxi-szukcini midet, 1442 ml metilén-kloridban oldva. 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
