201742. lajstromszámú szabadalom • Eljárás heterociklusos diszulfidek és az azokat tartalmazó gyógyszer- készítmények előállítására
1 HU 201742 B 2 3. táblázat Az egér peritoneál-makrofágjai által kiválasztott lizoszomális hidroláz-enzimek mennyiségére gyakorolt hatás >' *"z t “ rrrm ~ d HTTTO __tt/__n J£ Q a ~ 7TT7T ITTT^TT kezelés lx i. d. illetve p.o. ß-Glu mU/ml ß-Gal mU/ml ß-Ac-Glu mU/ml PBS 755/ 484 1306/ 1702 1238/1168 25 mg/kg 1001/ 897 2584/ 4917 2786/1947 vizsgált. 50 mg/kg 1370/1133 11058/ 9179 3315/2862 anyag 100 mg/kg 1791/1593 17596/13195 4305/3676 k 200 mg/kg 2136/1886 22351/17357 6548/5621 mCi/mg Au fajlagos aktivitású rádiókatív kolloid aranyat alkalmaztunk. A 4. táblázatban közölt eredmények a 8. példa szerint előállított vegyületnek az endocitózis teljesítményre kifejtett hatását szemléltetik. A találmány szerint előállított vegyülettel kezelt állatok peritoneál-makrofágjai a kolloid arany (198Au) pinocitózisát szignifikásan és dózistól függően fokozzák a kezeletlen állatok makrofágjaihoz viszonyítva. 4. táblázat Egérmakrofágok pinocitózis-teljesítményére kifejtett hatás 20 5. táblázat C. albicans-fertőzés utáni átlagos túlélési idő (5x10s CFU) Kezelés átlagos megbízhatósági hatás 15 2x60 mg/kg túlélési 95% 99% naponta i. p. idő (nap) PSB 9,7 8,4-10,6 7,8-10,9 Vizsgálati anyag 16,1 14,8-17,4 14,4-17,8 Kezelés 1 x_____intraperitoneálisan orálisan PSB 0,201xl03 cpm 0,150xl03 cpm ^25 mg/kg 0,415x103 cpm 0,365xl03 cpm Vizsgált 50 mg/kg 0,558x 103 cpm 0,448xl03 cpm 25 anyag ‘ 100 mg 0,718xl03 cpm 0,66lxl03 cpm 200 mg/kg 0,862x103 cpm 0,739xl03 cpm 3. kísérlet Balb/c-egerek Candida albicans-szel történő fér- 30 tőzéssel szembeni ellenállóságának fokozása a) Megelőző kezelés Balb/c-egereket 4 napon át naponta kétszer 60 mg/kg dózisú hatóanyaggal kezeltük intraperitoneálisan (8. példa szerinti vegyület). Az utolsó dózis beadása 35 után 24 órával az állatokat Candida albicans-szal (5xl04 5 CFU/egér) megfertőztük. A hatóanyag helyett fiziológiás konyhasó-oldattal kezelt kontrollt szintén megfertőztük. A pusztulási arányból az átlagos túlélési időt számítottuk. A kontroll csoport 50%-a 9,7 nappal 40 a fertőzés után pusztult el, míg a hatóanyaggal kezelt csoport átlagos túlélési ideje 16,1 nap volt. Az alkalmazott kezelési mód és dózis mellett (megelőző adagolás) a vizsgált anyag a Balb/c egér Candida albicans elleni rezisztenciáját szignifikánsan fokozza. b) terápiás kezelés Idült Candida albicans-fertőzés kezelése céljából nőnemű Balb/c- egereket (15/csoport) intravénásán Candida albicans-szal (2,5xl05 cfu/egér) megfertőztük (0. nap). A megfertőzés után az állatokat 8 egymást követő napon (3-10. nap) a 8. példa szerint kapott vegyülettel kezeltük intraperitoneálisan, 60,0 mg/kg dózisokkal. A kontroll állatokat fiziológiás konyhasóoldattal kezeltük. A 8., 14. és 21. napon vizeletmintákat vettünk, és a kórokozók számát (csíraszámot) meghatároztuk. A 30. napon az állatokat leöltük, és a csíraszámot, valamint a vesében található nekrózisok számát vizsgáltuk meg. A 6, táblázat azt mutatja, hogy a vizsgált hatóanyag terápiás dózisban az idült albicansfertőzés minden paraméterét (a vizeletben és a vesében található kórokozók számát és a veseszövet elhalását) csökkentette, azaz a betegséget befolyásolja. Majdnem valamennyi kontroll állat esetében kórokozókat találtunk a vizeletben, míg a kezelt állatoknál a csírák száma szignifikásan csökkent. A csíráknak a vesébe történő megtelepedését a hatóanyag 63%-ról 27%-ra, a nekrózisok gyakoriságát 87%-ról 10%-ra csökkenti. 6. táblázat Idült Candida albicans-fertőzés terápiás kezelése Kezelés Pozitív lelet Csírák a vesében Nekrózis a vesében 60 mg/kg i.p. 8. nap 14. nap 21. nap 30. nap 30. nap PBS 4/15 8/15 10/15 19/30 26/30 (27%) (53%) (67%) (63%9 (87%) Hatóanyag 1/15 1/15 4/15 8/30 3/30 (7%) (7%) (27%) (27%) (10%) 4. kísérlet A találmány szerint előállított vegyületeknek a DTH-reakcióra gyakorolt serkentése Az 1. kísérlet keretében leírt módon NMRI-egereket különböző új, a találmány szerint előállított vegyületekkel kezeltük. Az immunserkentés meghatározása céljából a DTH-reakciót viszgáltuk. A 7. táblázat különböző anyagok relatív hatását szemlélteti, 60 a 8. példa szerinti vegyülethez viszonyítva, amelynekhatása itt 100%- nak felel meg. A táblázatból kitűnik, hogy az alkalmazott vegyületekkel kezelt állatok esetén a DTH-reakció általában erősebb, mint a (8. példa szerinti vegyülettel kezelt) kontroll ese- 65 tében. 4
