201736. lajstromszámú szabadalom • Eljárás didehidro-D3-vitamin-származékok és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 201736 B 2 A (XIII) képletű vegyületet ezután előbb ezüstnitráttal reagáltatjuk, majd vizes alkanolos közegben (pl. etanolban és vízben) kálium-cianiddal hozzuk reakcióba és ily módon a megfelelő (XIV) képletű vegyületet nyerjük. A (XIV) képletű vegyületet hexafluor-aceton gázzal alkil-lítium (pl. butil-lítium) jelenlétében, éterszerű oldószerben (pl. tetrahidrofuránban) kb. -90 °C és -70 °C közötti hőmérsékleten - előnyösen -75 °C-on - történő kezeléssel alakítjuk a megfelelő (XV) képletű vegyületté. A (XV) képletű vegyületet fluor-hidrogénsavval acetonitrilben és tetrahidrofuránban történő kezeléssel alakítjuk a megfelelő (XVI) képletű vegyületté. A (XVI) képletű vegyületet oxidálószerrel 1-8 szénatomos alkil-halogenid oldószerben (a korábbiakban a (X) képletű alkoholnak a megfelelő (Ha) képletű ketonná történő átalakításával analóg módon) vízmentes nátrium-acetát jelenlétében alakítjuk a megfelelő (He) képletű ketonná. A (IIc) képletű ketont valamely szililező szerrel 5 történő kezeléssel alakíthatjuk egy (Ild) általános képletű vegyületté, a korábbiakban a (Ila) képletű vegyületnek (Ilb) általános képletű vegyületté történő átalakításával analóg módon. Patkányon mérjük a bélben történő kalcium ab- 10 szorpciót (ICA) és a csont kalcium mobilizációt (BCM), valamint patkányon, csirkén és borjún meghatározzuk az la,25-dihidroxi-kolekalciferolhoz [a továbbiakban X-vegyület vagy l,25-(OH)2D3] viszonyított kompetitiv kötődést (CB) a bélreceptorokon. 15 Az A-, B-, C- és D-vegyületre kapott értékeket az l,25-(OH)2Ü3 hatása százalékában kifejezve az I. táblázatban foglaljuk össze. I. táblázat Teszt- Hatás patkányon, az vegyület l,25-(OH)2D3 hatás %-ában kifejezve kifejezve Bélreceptorokhoz való kompetitiv kötődés (CB), az l,25-(OH)2D3 CB %-ában Koncentráció (ng/patkány) ICA BCM Patkány Csirke Borjú X 12,5 100 100 100 100 100 A 15,5 95 15 39 60 47 B 12,5 71 0 0 0 C 12,5 124 0 142 47 62 D 12,5 0 11 0 0 "i/.; Az I. táblázat eredményei igazolják, hogy az 1,25- 35 (OH)2D3 vegyülethez viszonyítva a C-23 helyzetben hármaskötést hordozó A-D-vegyületek általában nagyobb bél kalcium abszorpciót, mint csont kalcium mobilizáló aktivitást mutatnak és ezek az analógok az l,25-(OH)2Ö3 bél receptorokhoz kötődnek. 40 A fenti tesztek irodalmi helyei az alábbiak: Am. J. Physiol. 216, 1361 (1969); J. Physiol. 123, 114 (1954) illetve Biochem. J. 55, 182 (1979). II. táblázat Napi dózis (ng) Testtömeg (g) Ca2' (mg/dl) PO2' i (mg/dl) Kreatinin (mg/dl) Csont(mg/cm3) l,25-(OH)2D3 15 192±4,5 11,76±0,16 7,6110,31 0,3710,04 156+16 60 156±15 11,92+0,40 6,5810,30 0,3610,02 296156 C-vegyület 18 148±4,3 15,63+0,36 7,66+0,17 0,6010,05 385177 72 111+5,9 15,2310,22 6,3410,26 0,4310,06 746+48 D- Kontroll 148±1,3 5,6010,5 8,6510,6 0,4410,04 96,519 D+ Kontroll 202+3,1 10,4110,10 5,7610,12 0,4110,01 168115 A szérum kalcium- és foszfát-ion koncentrációját és kreatinin-koncentrációját, valamint a testtömeget és a csonttömeget 1,25- (OH)2Ü3-al vagy C-vegyülettel kezelt D3-vitamin-hiányos patkányokon, valamint 03-vitaminban dús táppal (D+ kontroll) vagy D3-vitamin-hiányos táppal (D-kontroll) etetett patkányokon értékeljük. Az eredményeket a H. táblázat tartalmazza. A fenti tesztek a 4 358 406 sz. amerikai egyesült 60 államokbeli szabadalmi leírásban kerültek ismertetésre. Az A-D-vegyület burjánzásellenes (AP) és differenciálódást előidéző (Dl) hatását emberi promieolitikus HL-60 sejteken határozzuk meg. A III. táblá- 65 zatban az AP hatást a sejtszám százalékos csökkenésével és a teszt-vegyületnek a sejtszám 50%-os csökkenését előidéző koncentrációjával (IC50) fejezzük ki. A Dl hatást a differenciált sejtek százalékában és a teszt-vegyület 50%-os sejtdifferenciálódást előidéző koncentrációjával (ED50) adjuk meg. 3
