201731. lajstromszámú szabadalom • Eljárás helyettesített benzamidok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 201731 B 2 vénán kisméretű bemetszést tettünk, és beillesztettük a katétert úgy, hogy annak szabad vége 5 cm hosszúságú trokáron keresztül a bőr alatt selyemvarrattal csatlakozott a nyakszirthez. A menyéteket egyenként helyeztük ketrecekbe és a vizsgálat előtt 2-4 napon át nyugalomban hagytuk. A vizsgálat napján a vizsgálandó vegyületeket 3 mg/ml vagy 1 ml/kg dózisban intravénásán adagoltuk a katéteren át, 5 perccel a ciszplatin előtt és 90 perccel a ciszplatin után. A ciszplatin- oldatot úgy állítottuk elő, hogy 70 °C hőmérsékletű fiziológiás konyhasóoldattal elegyítettük, és ultrahanggal kevertük a teljes oldódásig. Az így kapott, 4 mg/ml koncentrációjú oldatot 40 “C-on tartottuk, és intravénásán, 12 ml/kg dózisban a katéteren át adagoltuk. A ciszplatin beadása után a menyéteket 4 órán át folyamatosan megfigyeltük, és feljegyeztük a hányás jelentkezését. Ha 1 percen belül két vagy több hányástünet jelentkezett, akkor azt egyetlen hányási epizódnak tekintettük. A menyéteket a kísérlet végeztével intravénásán adott T-61 alkalmazásával leöltük, és meggyőződtünk a katéter megfelelő elhelyezéséről. E vizsgálat során kapott eredményeinket az 1. táblázatban foglaltuk össze, és a konyhasóval végzett kezeléshez viszonyítva százalékos védőhatásként (fokozatos válaszként) adtuk meg. A táblázatban minden egyes vizsgálat esetére feltüntettük a dózist és az állatszámot is. D) A gasztrokinetikus hatás vizsgálata Úgy találtuk, hogy számos, találmány szerinti vegyület növeli a téringerléssel kezelt tengerimalac ileum készítmények összehúzódását. E hatást úgy tekintik, hogy korrelációban áll az in vivo kifejtett gasztrokinetikus (prokinetikus) hatással, tehát a gyomor mozgékonyságának és ürülésének az elősegítésével. 300-400 g testtömegű normális, hím Charles River tengerimalacokat nyaki metszéssel leöltünk. Az ileum terminális szakaszát eltávolítottuk, és az ileum és coecum (vakbél) kapcsolódásához legközelebb eső 10 cm hosszúságú bélszakaszt elvetettük. A 3-4 cm 5 hosszúságú csíkokat 20 ml szervfürdőben függesztettük fel, amely Krebs-féle fiziológiás pufferoldatot tartalmazott. A pufferen át 95% oxigént és 5% széndioxidot tartalmazó gázelegyet buborékoltattunk, és 37 “C-on tartottuk. A tenziót (feszülést) 1,0 g-ra 10 állítottuk, és a szöveteket 15 percig ingerlés nélkül egyensúlyoztuk. Az elektromos ingerlés céljából platinadrótot (katódot) vezettünk át a belsején, és egy másik platinadrótot (anódot) csatlakoztattunk ahhoz az üvegrúdhoz, amelyre az izmot függesztettük. A 15 szöveteket koaxiálisán (tengelymenti irányban) ingereltük annak a feszültségnek 1,5-szörösével, amely a maximális összehúzódáshoz volt szükséges, aminek során 0,5 msec időtartamú pulzusokat alkalmaztunk 10 másodpercenként egyszer. A 15 perces egyensú- 20 lyozási (ingerlés nélküli) időszak után a stimulátort (Grass S88 Stimulator) bekapcsoltuk, és a szöveteket körülbelül 1 órán át stabilizálódni hagytuk, vagy addig az időpontig, amíg az összehúzódás állandósult; minden 20 percben mosást végeztünk. Az ileum 25 összehúzódását izometriásan regisztráltuk egy erőátviteli eszközzel (Grass FT03C) és egy Dynograph regisztráló berendezésen kijeleztük. A 2. táblázatban feltüntettünk néhány (I) általános képletű vegyületet, amelyek a téringerléssel kezelt tengerimalac ileum 30 készítmények összehúzódását megnövelték; ugyanott megadtuk a maximális növekvés átlagos százalékos értékét, a minimális hatásos koncentrációt (pM), az EC30-értéket (azt a koncentrációt, amely 30%-os hatást idézett elő) és egyes esetekben az ECío-értékeket 35 is (azt a koncentrációt, amely 50%-os hatást idézett elő; pM). 1. táblázat A dopaminerg-antagonizmus és az antiemetikus hatás vizsgálata A példa sorszáma BMY-szám A 3H-spiperon leszorítása IC50 (mmól) Az apomorfinnal előidézett hányás gátlása kutyán ED50 (mg/kg, s.c.) A ciszplatinnal előidézett hányás gátlása menyéten Dózis Százalékos (mg/kg, i.v.)x2 védőhatás (állatszám - 3) 8A. 33461 >1000 — 1 86 11. 33474 >1000 — 1 68 12. 33469 >1000-1 18 10. 33462 >1000 >2,5 1 59 17. 33586 >1000 — * állatszám - 4 2. táblázat A gasztrokinetikus hatás vizsgálata A példa BMYA készítmények A maximális A minimális EC50 (95%-os megsorszáma szám száma növekedés átlagos hatásos bízhatósági határral) %-a (konc. pmól/1) koncentráció (pmól/1) 8A. 33461 2 10% (10 pmól) 10-11. 33474 4 64% (3 pmól) 0,1 0,85 (0,39-2,7) 6
