201730. lajstromszámú szabadalom • Eljárás indán-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyászati készitmények előállitására
1 HU 201730 B i vitás több mint 50%-át felszabadítja, akkor újabb vizsgálatnak vetjük alá hét különböző dózisban annak megállapítása céljából, hogy melyik az a dózis, amely a receptorhoz specifikusan kötött rádioaktivitás 50%át gátolja. Ilyen módon meghatározható az 50%-os gátlási koncentráció. A nem-specifikus kölcsönhatás az ún, U-50488 H [Lahti és munkatársai ismertetik a Life Sei., 31, 2257 (1982) szakirodalmi helyen] megnevezésű termék 10'3 * 5 mól koncentrációban való adagolása útján, háromszoros ismétlésben. Ezután 25 °C-on 40 percen át inkubálást végzünk, majd 0 °C-os vízfürdőt alkalmazunk 5 percen át, ezután vákuumban szűrést végzünk, 7,7 pH-értékű Tris-pufferrel átöblítünk és végül a rádioaktivitást scintilláló hatású Trition(koktél) jelenlétében megszámoljuk. A kapott eredményeket közvetlenül mint 50%-os gátlási koncentrációkat (IC50) fejezzük ki, azaz más szóval ez alatt a vizsgált vegyületnek azt a koncentrációját értjük, amelyre szükség van a vizsgált receptorhoz kötődött specifikus rádioaktivitás 50%-ának helyettesítéséhez. A kapott eredményeket nmólban adjuk meg. A példa sorszáma: IC50 nmól 1 1,8 5 3 6 7,5 8 7,1 9 2,7 14 3,8 16 5 22 7,1 25 2,2 29 5,6 2) Fájadalomcsillapító hatás (ún. forrólemezes kísérlet) 22-24 g tömegű, nőstény egereket helyezünk el külön-külön olyan rézlemezen, amelyet 56 °C-on tartunk. A fájdalom mértéke abból látható, hogy hogyan kapja fel az állat elülső mancsait. Ennek a reakciónak az idejét feljegyezzük és csak olyan egereket tartunk meg kísérleti állatként, amelyek 8 másodpercnél rövidebb reakcióidővel bírnak. Az állatokat ezután homogén csoportokra osztjuk, majd a vizsgált vegyülettel kezeljük orálisan. Az egyik csoport csak hordozóanyagot kap. A kezelés után 30-60 perc elteltével a fájdalommal szembeni reakcióidőt ismételten megmérjük. Az aktív dózis vagy AD 100 alatt azt a dózist értjük, amely a reakcióidőt 100%-kal növeli a kezelés után 30 perccel, figyelembe véve a kontroll állatok reakcióidejében bekövetkező változást. Az 1. példa szerinti termék esetében az AD 100 értéke 50 mg/kg. 3) Vérnyomáscsökkentő hatás vizsgálata érzéstelenített patkányokon Sprague-Dawley (CR) törzsbeli, hím patkányokat 60 mg/kg dózisban nátrium-pentobarbitált beadva intraperitoneálisan érzéstelenítünk. A torokvénába katétert vezetünk a vizsgálandó vegyületek injektálása céljából, ugyanakkor a karotid artériába is katétert vezetünk az artériás nyomás rögzítése céljából. A vizsgálandó vegyületet 10%-os etanollal visszük oldatba, majd 1 ml/kg dózisban injektáljuk. A nyomást a vizsgálandó vegyület injektálása után 5 perccel és 30 perccel rögzítjük. A következő táblázatban megadjuk azokat a változásokat, amelyek jelentkeznek a kiindulási vegyület beadása után az artériás nyomásban. Ezek a változások %-os változások. A példa sorszáma dózis (mg/kg) beadás után 5 perc beadás után 30 perc 1. 10-13-19 1-19-23 4. 10-26-14 5. 10-25-10 1-20-20 8. 1-25-27 14. 1-22-26 9. 10-32-31 4) A diuretikus hatás vizsgálata A kísérletekhez a vizsgálat megkezdés előtt 17 órán át éhezte tett, 180-200 g tömegű, Sprague Dewley törzsbe tartozó, hím patkányokat használunk, amelyeknek azonban víz tetszés szerint áll rendelkezésére. Mindegyik vizsgálandó dózishoz 8-8 kísérleti állatot használunk. A patkányok vagy vizsgálandó hatóanyagot vagy az ennek beadására szolgáló hordozóanyagot kapnak orálisan. A kísérleti Vegyület beadását követően 5 órán át minden órában mérjük a vízelettérfogatot. Ennek az időszaknak a végén a vizeleteket összegyűjtjük, majd a vegyület aktivitását a tih-t5h időszaknak megfelelő vízelettérfogat %-os változásaként fejezzük, ki. A kapott eredményeket a következő táblázat mutatja: A példa dózis A vízelettérfogat sorszáma: (mg/kg) %-os változása 1. 5 +188 1. 5 +190 8. 5 +130 2,5 +124 14. 5 +68 9. 10 +74 5) Antiaritmiás aktivitás vizsgálata patkányokon 300-350 g tömegű, hím patkányokat intraperitoneálisan érzéstelenítünk 1,20 g/kg dózisban uretánnal, majd légcsőmetszést hajtunk végre és mesterséges lélegeztetést kezdünk, 40-50 belégzéssel percenként. Szubkután tűket implantálunk, hogy a patkányok elektrokardiogrmját rögzíthessük a DH-derivációs szignál szintjén. A kísérleti vegyületet intravénás úton adjuk be. A beadás után 5 perccel a patkányok torokvénájába perfúzió útján 10 pg/kg dózisban 0,2 ml aconitine-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 16
