201678. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán retrovírus elleni 3'-azido-3'-dezoxitimidin-származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
3 HU 201 678 B 4 lenti, hogy a vegyület esetében vírusellenes hatást nem állapítottak meg. Különösen említésre méltó a vesicularis Stomatitis vírus elleni hatás hiánya, mivel ez a humán retrovírusokhoz hasonlóan szintén RNS vírus. Az aktivitás hiánya jelzi az L1210 sejtek esetében mért ID50 = =280 pg/ml érték is. Mindezek alapján kimondható, hogy e publikáció alapján semmiféle útmutatás nem volt nyerhető az AZT esetleges vírusellenes vagy lumorellenes hatására vonatkozóan. Az Exp. Cell. Res. (116, 1978,21-12) és Proc. Nat. Acad. Sei. USA (77,1974,4980-85) publikációk bizonyos vegyületek - köztük az AZT - egér Frien Leukemia Vírus (FLV) sejtek elleni hatásáról számolnak be. A cikkekkel kapcsolatban kétalapvető fontosságú dolgot kell jpémelni: Az egyik a) a speciális patkány-rendszerrel Ilyen tapasztalatok, a másik b) ezen tapasztalatok alkalmazhatósága a humán gyógyászatban. Ami az a) pontot illeti, a publikációkban leírják, hogy az AZT adagolása esetén csökken a sejtekből a C-típusú FLV részecskék felszabadulása és nő az A-típusú FLV- részecskék termelődése a sejten belül, amely A-típusú részecskék a C-típusú vírusok sejten belüli endogén vagy exogén formái. A vizsgálatok szerint az AZT nem gátolja az A-típusú részecskék replikációját (ismétlődését). A C-típusú részecskékkel kapcsolatban a vizsgálati eredmények azt mutatják, hogy az AZT gátolja az ilyen részecskék felszabadulását, de azok ismétlődését megakadályozni nem tudja. Ily módon, ha a C-típusú részecskék felszabadulása tágolva is van, a vírus részecskék a sejten belül továbbra is képesek friss sejteket megfertőzni, például sejtérintkezés útján. A fenti publikációkban semmiféle tudományosan elfogadható bizonyíték nincs, ami a vírus ismétlődésének gátlását bizonyíthatná, azaz ezen publikációk sem adhatnak semmiféle támpontot az említett vegyület humán gyógyászati alkalmazására. A kísérleteknél egészen speciális, állati eredetű sejttenyészetet alkalmaztak, amely a humán gyógyászattal, különösen a vírusellenes szerek értékelésével nem hozhatók összefüggésbe. A fent említett b) ponttal kapcsolatban a következőket említjük: A tudomány jelenlegi állása, illetve ismeretei alapján semmiféle alap nincs arra, hogy az egér FLV vírussal kapcsolatos megállapításokat humán vírusokkal, így pl. az AIDV vírussal kapcsolatban alkalmazni vagy hasznosítani lehetne. Az FLV és AIDV vírusok között ugyanis biokémiai és virológiái szempontból egyaránt olyan jelentős különbségek vannak, amelyek nem teszik lehetővé, hogy közöttük bármiféle összehasonlítás történhessen vagy az egyiknél nyert tapasztalatok a másiknál felhasználhatók legyenek. Azt a tényt, hogy a szerkezeti különbségek valóban befolyásolják a vírusok fogékonyságát a vírusellenes (vírusölő) kezelések esetén, ribavarinnal kapcsolatos vizsgálati eredmények bizonyítják. Shannon vizsgálata szerint [Annals of the New York Academy of Sciences, 472-507 (480. oldal)] e vegyület ED50 értéke Gross egér leukémia vírussal (MLV) szemben 3,2 pg/ml, míg Yarchoan, Brodcr és munkatársai („Strategies for the Pharmacological Intervention Against HTLV-III/LAV”, 353, oldal, National Cancer Institute, Bethcsda, 1987) csak részleges gátló hatást tudtak kimutatni (100 pg/ml) HIV in vitro vizsgálata során. A HÍV (Humán Immunodeficiency Virus) az AIDS vírus jelenleg elfogadott megnevezése. Mi felismertük azt, hogy a 3’-azido-3’-dezoxitimidin gyógyászatiig elfogadható, ismert észterei és sói meglepően jelentős aktivitással rendelkeznek humán retrovírusokkal szemben, különösen nagy aktivitásúak AIDV ellen, mint ahogy ezt a későbbiekben megadott vizsgálatok is bizonyítják. Az ilyen aktivitás lehetőséget ad a vegyület felhasználására emberi retrovírus-ferlőzések gyógyításában. Ezek alapján, a jelen találmány tárgya az ismert eljárások szerint előállított (I) képletű vegyületet, a 3’-azido-3’-dezoxitimidin gyógyászatiig elfogadható bázisos sóit és 5’-trifoszfátját vagy -acetátját tartalmazó, emberi retrovírus-fertőzések kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítási eljárása. A találmány értelmében a gyógyászatiig elfogadható bázisos só megnevezés alatt olyan származékokat értünk, amelyek a betegnek történő beadás után - közvetlenül vagy közvetve - 3’-azido-3’-dezoxitimidinné alakulnak. Ilyenek a trifoszfát és az acetátészterck is, valamint a bázisos sók, előnyösen például a nátriumsó. Az „ismert eljárások szerint előállított” kifejezés a jelen találmány elsőbbségi napja előtt publikált eljárásokat öleli fel. A 3’-azido-3’-dezQxitimidin emberi retrovírusokkal szembeni aktivitását különböző in vitro rendszerben vizsgáltuk. Például, H9 humán limfoblasztoid sejtvonal fertőzését AIDV-vcl a 3’-azido-3’-dezoxitimidin 0,013 pg/ml alatti koncentrációban, a fertőzés után 20 órával is hatásosan gátolja. Az U937 humán limboflaszloid sejt, a PHA-stimulált fehérvérsejt, és a tenyésztett perifériás vérlimfocita AIDV fertőzését hasonlóan alacsony koncentrációban szintén gátolja. Ezen túlmenően, a 10 napos kísérletben egészen 5000 AIDV vírusig per sejt és T4-klónozott, tetanuszspecifikus, T-helper limfocita alkalmazásával sejtcsökkenés nem mutatkozik 3’-azido-3’-dezoxitimidinnal kezelve, míg a nem kezelt sejtek ötszörös csökkenést mutatnak. HTLV-I-el transzformált, és AIDV-vel szuperfertőzölt azonos sejtvonal citopatikus hatása szintén teljesen blokkolt. Klinikai vizsgálatok azt mutatják, hogy tisztított AIDV rcverz-transzkriptáz enzim aktivitását a 3’-azido-3’-dezoxitimidin trifoszfátja kompetetív gátló mechanizmussal blokkolja. Az I fázis klinikai vizsgálata szintén azt mutatja, hogy a 3’-azido-3’-dczoxitimidin képes a vér-agygátat áttömi klinikai hatásos mennyiségben. Ez a tulajdonság a humán retrovirus által okozott CNS fertőzés kezelésére és megelőzésére egyaránt szokatlan és értékes. A 3’-azido-3’-dezoxitimidin azon képességét, hogy a retrovirus előidézte rosszindulatúság befolyását módosítja, egér-modellel bizonyítottuk, melyben a 3’-azido-3’-dezoxiiimidin adagolása az intravénásán adagolt Rauscher Turine Leukeamia Virus, a HTLV-I murin ekvivalense által előidézett epelnomegáliát gátolja. További kísérletekben a 3’-azido-3’-dczoxitimidin azt mutatta, hogy a HTLV-I ismétlődését 0,8 pg/ml alatti koncentrációban in vitro gátolja. Ezek szerint a jelen találmány további előnyös jellemzője: találmány szerinti vegyületek felhasználása gyógyszerek előállítására emberi retrovírus-fertőzések kezelésére vagy megelőzésére. Emberi retrovírus-fertőzések, melyek a találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítményekkel kezelhetők vagy meggátolhatok, például T-sejt limfotropikus retrovírusos (HTLV), különösen a HTLV-I, a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
