201566. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a humán növekedési hormon elválasztását serkentő faktor új analógjainak és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítményeknek és állattenyésztésben alkalmazható készítményeknek az előállítására
3 HU 201566 B 4 A hGRF(l-30)-NHz képlete: H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-NH2 A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű új peptidek savvadiciós sóinak előállítására H-Tyr-Ala-Asp-Ala-IIe-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly--Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu- (I) -Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-Gaba-Y - a képletben Y hidroxilcsoportot vagy aminocsoportot jelent. A találmány értelmében úgy járunk el, hoy a megfelelően védett aminosavakat a peptidkémiában ismert módszerekkel a megfelelő sorrendben összekapcsoljuk, a védőcsoportokat lehasitjuk, és kívánt esetben a savaddíciós sóként kapott pepiidet egy másik savaddiciós sóvá alakítjuk. Az (I) általános képletű vegyületeket a peptidkémiában ismert módszerekkel állíthatjuk elő. A vegyületeket előállíthatjuk folyadékfázisban a megfelelően védett aminosavak vagy - előnyösebben - a megfelelően védett aminosavakból előállított fragmensek - adott sorrendben végrehajtott kondenzációjával; az (I) általános képletű vegyületeket azonban különösen előnyösen szilárd fázisú szintézissel állítjuk elő. Az utóbbi esetben a megfelelően védett Gaba-t kapcsoljuk először a gyantához, és ehhez kapcsoljuk a szekvenciának megfelelő sorrendben az alkalmasan védett aminosavakat vagy az azokból felépített fragmenseket. A találmány szerint előállított új vegyületeket a humán gyógyászatban és az állattenyésztésben a növekedési hormon elválasztásának stimulálására használhatjuk. Erre a célra gyógyszerkészítményeket, illetve az állattenyésztésben felhasználható kompozíciókat állítunk elő. A találmány tárgya tehát továbbá eljárás a növekedési hormon kibocsátását elősegítő gyógyszerkészítmények előállítására. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a fentiek szerint előállított, gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós só formájában kapott (I) általános képletű vegyületeket a szokásos gyógyszerészeti segédanyagokkal összekeverjük, és gyógyszerkészítményekké alakítjuk. A találmány továbbá az állattenyésztésben felhasználható kompozíciók előállítására vonatkozik, amelynek során a fentiek szerint előállított, az állattenyésztésben felhasználható savaddíciós só formájában kapott (I) általános képletű vegyületeket állattenyésztési célokra alkalmas segédanyagokkal összekeverjük, és állattenyésztésben felhasználható kompozíciókká alakítjuk. Az (I) általános képletű vegyületek savaddíciós sói például hidrokloridok, hidrobromidok, szulfátok, foszfátok, maleátok, acetátok vagy citrátok lehetnek. A gyógyszerkészítmények és az állattenyésztésben felhasználható kompozíciók például intravénásán, intramuszkulárisan, szubkután, intranazálisan és orálisan adagolható készítmények lehetnek. Az orálisan adagolható készítmények közé tartoznak a tabletták, amelyek a hatóanyag mellett segédanyagokként például hordozóanyagokat (így kalcium-karbonátot), kötőanyagot (igy tragakantot, kukoricakeményitót-vagy zselatint), szétesést elősegítő anyagot (igy alginsavat) és sikositó anyagot (igy magnézium-sztearátot) tartalmazhatnak. Folyadékformájú adagolás esetén a készítményhez ízesítő anyagokat is adhatunk. Az állattenyésztésben felhasználható, orálisan adagolható készítmények takarmány premixek is lehetnek. Az injekció formájában beadandó készítmények a hatóanyag mellett injekciós célokra alkalmas folyékony hordozóanyagot, például izotóniás sóoldatot vagy foszfát-pufferoldatot tartalmaznak. A hatóanyagokat nyújtott hatású készítményekké is alakíthatjuk például úgy, hogy a hatóanyagokat ismert, nyújtott hatást biztosító polimerbe ágyazzuk. A hatóanyagok szükséges napi dózisa több tényezőtől, köztük a kezelendő egyed fajtájától, az adagolási módtól és az elérni kívánt hatástól függően változik, rendszerint azonban napi 1-100 ug/testtömeg kg dózist alkalmazunk. Az (I) általános képletű vegyületek savaddíciós sóinak biológiai aktivitását in vitro és in vivo körülmények között vizsgáltuk úgy, hogy a GH kiválasztást mértük az adagolt vegyület koncentrációjának függvényében. Az így kapott adatokat a natív hpGRF, illetve hGRF(l-29)-NH2 adagolásakor kapott értékekkel hasonlítottuk össze. A kiválasztott GH mennyiségét radioimmun analízissel határoztuk meg, 95%-os megbízhatósági határral. In vitro körülmények között a sejtkultúrán végzett meghatározás alapján körülbelül ötvenszeres, szuperfúziós vizsgálatokban körülbelül kétszeres aktivitást tapasztaltunk a natív hpGRF-44 aktivitásához viszonyítva. A sejtkultúrás vizsgálatok eredményét az 1. ábrán mutatjuk be. A kísérleteket patkány hipofízis ún. monolayer sejtkultúrával végeztük, a diagramon 18 kísérlet eredményét összesítettük. A hpGRF-44 aktivitását Nle^.Gaba^-hGRFÜ-SOJ-NHz-acetátsó (az ábrán SzB-4-179 kóddal jelölt vegyület) aktivitásával hasonlítottuk össze. A GH kiválasztást az adagolt peptidek koncentrációjának függvényében ábrázoltuk. Az .alap' a sejtek természetes GH kiválasztásának felel meg. Az ábrából látható, hogy azonos STH release ng/tenyészet eléréséhez mintegy ötvenszeres hpGRF-44 koncentráció szükséges a találmány szerint előállított vegyület koncentrációjához viszonyítva. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
