201509. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenolszármazékokat hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények és a hatóanyagok előállítására
1 HU 201509 B 1 4.táblázat A vegyület NMR-spektrum száma TMS belső standard 8 (ppm) 68 0,95-1,78 (6H), 1,83-2,43 (4H), 2,14 (3H), 2,23 (3H), 2,31 (3H), 4,42 (2H), 4,65 (1H), 5,09 (2H), 5,5-6,5 (1H), 6,77-7,53 (4H), 7,36 (10H) *: DMSO-de 23. példa Gyógyászati készítmények előállítása A) Kapszula (1) 21. számú vegyület 50 mg (2) Finom cellulózpor 30 mg (3) Laktóz 37 mg (4) Magnézium-sztearát 3 mg Összesen 120 mg A fenti (1), (2), (3) és (4) komponenseket öszszekeverjük és zselatinkapszulába töltjük. B) Lágy kapszula (1) 16. számú vegyület 50 mg (2) Búzaolaj 100 mg Összesen 150 mg A fenti (1) és (2) komponenst összekeverjük és lágy kapszulába töltjük. C) Tabletta (1) 27. számú vegyület 50 mg (2) Laktóz 34 mg (3) Búzakeményítő 10,6 mg (4) Búzakeményítő (paszta) 5 mg (5) Magnézium-sztearát 0,4 mg (6) Kálium-karboxi-metil-cellulóz 20 mg Összesen 120 mg A komponenseket ismert módon összkeverjük és tablettákká sajtoljuk. A következő kísérleti példákban az (I) általános képletű fenolszármazékok farmakológiai hatását mutatjuk be. 15 20 25 30 35 40 1. kísérleti példa Tromboxán Az (TXA2) receptor antagonizmus Tromboxán Az (TXS2)-utánzók által nyulak aortájára kifejtett összehúzódás gátlása Az eljárás: Nyulak aortájának spirális csíkját (2-3 mm széles, mintegy 3 cm hosszú) Krebs-Henseleit-oldatban szuszpendáljuk 2 g terhelés mellett. A Krebs-Henseleit-oldatot 95 % oxigént és 5 % szén-dioxidot tartalmazó gázzal telítjük és 37 °C hőmérsékletre melegítjük. A vaszkuláris csík TXA2 utánzó U-440691 (10-' mól) és az U-466193 (3x 10~K mól) által kifejtett összehúzódásának a gátlását vizsgáljuk a 13. számú vecyülettel 30 perccel korábban való kezelés után. b) U-44069: (5Z. 9a, 11a, 13E, 15S)-15-hidroxi-9,1 l-(epoximetáno)-proszta-5,13-diénsav (gyártó The Upjohn Company. Amerikai Egyesült Államok) 2) U-46619: (5Z. 9a, 11a, 3E, 15S)-15-hidroxi-11,9-(epoximetáno)-proszta-5,13-diénsav (gyártó: Cayman Chemical Company). Az eredmények: Az eredményeket az 5. táblázat mutatja. A táblázatban az U-46619 adagolását jelenti. 45 50 55 60 65 5. táblázat A vegyület száma 10-"5 mól Gátlás (%) 10-6 mól 10-7 mól 1 100 56 — 9 100 27-21 — 99 5 22 100 45-12 100 79 12 17 — 98 12 27--98 32* — 100 95 37* —-100 35* — 98 23 52* — — 96 2. kísérleti példa Specifikus [3H] U-46619 kötődés gátlása tengerimalacok vérlemezke membránjához Az eljárás: Normál tengerimalacok vérét összegyűjtjük 0,315 %-os citrát-oldatban, amely aszpirint (végső koncentráció 1 mmól) tartalmaz és 3000 ford./perc sebességgel 5-6 másodpercig centrifugáljuk. A PRP-t (vérlemezkében gazdag plazma) 4800 ford./perc-nél centrifugáljuk 10 percig 4 °C hőmérsékleten. A vérlemezkemembránokat a következők szerint állítjuk elő: a visszamaradó plazmaprotein eltávolítására a vérlemezkepelletet egyszer 30 ml, 25 mmól Trisz-HCL/5 mmól MgCb-t tartalmazó pufferrel (pH 7,4) mossuk, majd ismét centrifugáljuk a vérlemezkepelletek kialakulása céljából. A vérlemezkéket ezután 20 ml előzőekben leírt pufferben reszuszpendáljuk és a sejteket ultrahangos kezeléssel szétroncsoljuk. Az ultrahangos kezelést jégen végezzük Kontes Sonicator (Vineland, New Jersey) berendezésen. A vérlemezkéket összesen 90 percig vetjük alá ultrahangos kezelésnek 15 perces lökésekkel, amelyeket 15 perces megszakítások követnek. Az ultrahanggal kezelt elegyet 100000 x g sebességgel centrifugáljuk 1 órán át és a membránfrakciót a már említett pufferben szuszpendáljuk. A protein-koncentrációt 1 mg/ml értékre állítjuk be. A kötési vizsgálatot 25 °C hőmérsékleten 30 percig végezzük. A reszuszpendált membrán-frakcióból 1 ml-t 4 mmól [3H] U-46619-cel inkubálunk. Az inkubációs elegyet üvegszálas membránon (GF/C, Whatman) szűrjük és így elválasztjuk a szabad [3H] U-46619 által kötött membrántól. A membránokat gyorsan mossuk kétszer 5 ml hideg pufferrel, öszszekeverjük 4 ml ÁCS szcintillációs folyadékkal és számoljuk a [3H] U-46619-t. Az eredmények: Az eredményeket a 6. táblázat mutatja. 23
