201352. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-(2,3-epoxi-propoxi)-fenil-ecetsav és 4-(2-hidroxi-3- -/izopropil-amino/-propoxi-fenil-ecetsav észterei, valamint 4-(2-hidroxi-3-/izopropil-amino/-propoxi)-fenil-acetamid sztereospecifikus előállítására
5 HU 201352 B 6 kát hozzáadhatjuk az előzőekben ismertetett tenyészkózegben, szaporodási állapotban. A mikroorganizmusokat kiegészíthetjük valamilyen koszubsztr&tummal is. A 4-(allil-oxi)-fenil-ecetsav-észter 4- - (2,3-epoxi-propil )-fenil-ecetsav-észterré való konverziója közben a mikroorganizmusok lehetnek szaporodási fázisban vagy a minimális tenyészközeg alkalmazásával lényegében nem szaporodó fázisban. Minimális tenyészközegként olyan, szokásos tenyészközeget alkalmazhatunk, amely szükség esetén valamilyen asszimilálható szénforrást, pl. glükózt, etanolt, hexánhoz (C6) hasonló szénhidrogéneket, valamilyen nitrogénforrást, pl. ammónium-szulfátot, ammónium-nitrátot és ammónium-kloridot, valamint valamilyen szervetlen tápanyagforrást, pl. nyomnyi mennyiségű foszfátot, magnéziumot, káliumot, cinket, vasat és egyéb fémeket tartalmaz. A mikroorganizmusokat tarthatjuk nem szaporodó állapotban is, pl. az asszimilálható szénforrás vagy a nitrogénforrás kiiktatásával. Előnyösen alkalmazható az adott esetben egy vagy több adalékanyaggal dúsított PSX közeg. Az ilyen fázisban lévő mikroorganizmusok alkalmazása esetén előnyösen 0-45 °C hőmérsékletet és 3,5-9 pH értéket tartunk. A mikroorganizmusokat előnyösen 30-45 °C-on és 5-8 pH értéken tartjuk. Az ilyen fázisú mikroorganizmusok alkalmazása esetén olyan levegőztetés szükséges, amely lehetővé teszi az előzőekben ismertetett eljárásnak megfelelően, hogy elegendő oxigén álljon rendelkezésre mind a mikroorganizmusok anyagcseréjéhez, mind a 4-(allil-oxi)-fenil-ecetsav-észter 4-(2,3-epoxi-propoxi)-fenil-ecetsav-észter való konverziójához. Az előzőekben ismertetett mikroorganizmusokkal előállított 4-(2,3-epoxi-propoxi)-fenil-ecetsav-észter bármely, jól bevált eljárással kinyerhető és tisztítható. A találmány szerinti eljárással előállított R—(—)—4— (2,3-epoxi-propoxi)-fenil-ecetsav-észter, S-(+)-4-(2,3-epoxi-propoxi)-fenil-ecetsav-észter vagy ezek elegyei a megfelelő R—(+)— -atenolollá, S-(-)-atenolollá vagy ezek elegyeivé alakíthatók át az ezt követő, izopropil-aminnal és ammóniával megvalósított kémiai reakcióban. Az S-(-)-atenolol előállításának egyik példáját ismertetik a 2 453 324 számú nyilvánosságra hozott német szövetségi köztársasági szabadalmi bejelentésben. Ebben az eljárásban az abszolút S-konfigurációjú vegyületet a kémiai úton előállított abszolút S-konfigurációjú aril-glicidil-éterekből állítják elő izopropil-asninnal. Az S- vagy R-4-[2-hidroxi-3-(izopropil-amino)-propoxi]-fenil-ecetsav-metilészter S- vagy R-atenolollá való kémiai konverziója ammónium-hidroxid oldattal vagy vízmentes ammóniával történhet. Az ammónium-hidroxid oldat alkalmazása az S-4-[2-hidroxi-3-(izopropil-amino)-propoxi]-fenil-ecetsav-metilészterből kiinduló S-atenolol előállításánál kis termékhozamot eredményez, és az észter hidrolízise következtében nagy mennyiségű, szabad sav keletkezik, azonban vízmentes ammónia alkalmazásával a kívánt termék jó kihozatallal nyerhető ki. A keletkezett atenolol kívánt esetben gyógyászatilag elfogadható, pl. savaddiciós sóvá alakítható. Ennek megfelelően a találmány szerinti eljárással az (S)-atenolol terméket úgy állítjuk elő, hogy az (S)-4-l2-hidroxi-3-(izopropil-amino)-propoxi]-fenil-ecetsav-metilésztert ammóniával reagáltatjuk, majd az atenololt kinyerjük és/vagy gyógyászatilag elfogadható sóvá alakítjuk. Gyógyászati termékekhez előnyösen az olyan elegyek alkalmazhatók, amelyek főleg S-(-)-atenololt tartalmaznak. Előnyösen azok a vegyületek alkalmazhatók, amelyek legalább 80%, még előnyösebben azok, amelyek legalább 90% S-konfigurációjú vegyületet tartalmaznak. 4-(AUil-oxi)-fenil-ecetsav-észter Pseudomonas oleovorans mikroorganizmusokkal megvalósított epoxidálásával 25 mg/g/h termelékenység érhető el egy 3 órás termelési ciklus alatt, és a termékkoncentráció 1,3 g/1. Növelhető a termelékenység, ha szubsztrátumként 4-allil-oxi-fenil-ecetsav-észter és ko-szubsztrátumként glükózt alkalmazunk, az így elérhető termelékenység 94 rag/h/h értékig, a terhiékkoncentráció 4,1 értékig felmehet egy 3 órás ciklus alatt. A kapott termék a kísérleti hibahatáron belül enantiomerikusan tiszta. Az optikai tisztaságot - ezt a kifejezést a leírásunkban a későbbiekben alkalmazzuk - az enantiomer többlet százalékos értékében fejezzük ki a következő képlettel: S - R S + R A következő példákat találmányunk részletesebb ismertetésére mutatjuk be, anélkül, hogy az igénypontok terjedelmét korlátoznánk. 1. példa 4 - (AUil-oxi)-fenil-ece tsa v-metilészter á talakitésa 4-(2,3-epoxi-propoxi)-fenil-ecetsav-metilészterré Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 alkalmazása val Elótenyésztett Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 kultúrával oltottunk be olyan, 7,0 pH-jú PSX közeget, amely 0,75% glicerint és 0,05% dietoxi-metánt tartalmazott. A PSX közeg összetétele: 8,92 g/1 koncentrációjú KH2PO4 oldat, 2,94 g/1 koncentrációjú Na2HPÜ4 oldat, 1,0 g/1 koncentrációjú (NH4)zHP04 oldat, 0,2 g/1 koncentrációjú (NH4)zS04 oldat, 0,2 g/1 koncentrációjú KC1 oldat, 0,294 g/1 koncentrációjú Na3-citrát oldat, 0,005 g/1 koncentrációjú CaS04.2H20 ol-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
