201347. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és szintetikus táptalaj pseudomonas aeruginosa szelektív kimutatására
5 HU 201347 B 6 nátrium- vagy kálium-hidrogén- vagy -dihidrogén-foszfátokat alkalmazhatunk. Ezek közül előnyösebbek a káliumkationt tartalmazó savanyú foszfátok, mert a káliumionok egyúttal elősegítik az acetamidból felszaba- 5 dúlt ammónia beépülését a baktériumtestbe. A foszfátpuffer(ek) maximális mennyisége 0,1 mól/dm3 lehet. Amennyiben a nitrát-redukciós próbát már a tenyésztés során el kívánjuk végezni, 10 a folyékony táptalajhoz nitrátokat és oxidálható kénvegyületeket is adunk. A nitrátion forrásaként bármilyen, vízben megfelelően oldódó szervetlen nitrátot felhasználhatunk; ezek közül - a kation korábban tárgyalt 15 kedvező hatása miatt - a kálium-nitrát a legelőnyösebb. A folyékony táptalaj legföljebb 0,05 mól/dm3 nitrátion-forrást tartalmazhat. Az oxidálható kénvegyület a nitrátion nitrogénné redukálódásának folyamatában elekt- 20 ronátvivó mediátorként hat. Oxidálható kénvegyületként például elemi ként, tioszulfátokat, szulfidokat, szulfitokat és tioglikolátokat használhatunk. Ezek közül a legelőnyösebbnek az elemi kén és a tioszulfátok bizonyul- 25 tak; ezek az anyagok ugyanis a baktériumra semmiféle mérgező vagy gátló hatást nem fejtenek ki, sőt serkentik a baktériumfehérjék képződését, fokozzák a pigmenttermelést, ezen kívül stabil, önoxidációra nem hajlamos 30 anyagok. Az oxidálható kénvegyület - amely megjelölés az elemi kénre is vonatkozik - maximális mennyisége a folyékony táptalajban 0,03 mól/dm3 lehet. Kívánt esetben a folyékony táptalajhoz 35 - a felületi feszültség csökkentése céljából - polietilénglikol detergenst is adhatunk legföljebb 100 cm3/dm3 mennyiségben. A szilárd táptalajoknak vizes közegben 16-20 g/dm3 agar-agart és 0,01-0,1 mól/dm3 40 acetamidot kell tartalmazniuk. Kívánt esetben a folyékony táptalajok komponenseinek ismertetésénél már közölt célokból legföljebb 0,5 mól/dm3 magnézium-szulfátot, legföljebb 0,1 mól/dm3 foszfátpuffert és/vagy legföljebb 45 0,06 mól/dm3 alkálifém-szulfátot is adhatunk a szilárd táptalajokhoz. Minthogy szilárd táptalajokon a nitrát-redukciós próba a tenyésztéssel egyidóben nem végezhető el, nitrátion-forrás és oxidálható kénvegyület 50 beadagolására nincs szükség. Amennyiben a tenyésztést szilárd táptalajon végezzük, és a növekedő mikroorganizmusokat teljes bizonyossággal kívánjuk Pseudomonas aeruginosaként azonosítani, a nitrát-redukciós próbát 55 utólag végezzük el. A nitrát-redukciós próba tenyésztés közbeni elvégzésére is alkalmas folyékony táptalaj komponenseit szilárd formában is forgalomba hozhatjuk. A szilárd táptalajok 60 acetamidot, nitrátion-forrást, oxidálható kénvegyületet, továbbá adott esetben magnézium-szulfátot és/vagy foszfátpuffert tartalmaznak (0,01-0,1) : (0,0001-0,05) : (0,00006- -0,03) : (0-0,5) : (0-0,1) mólarényban. 65 A találmány szerinti eljárás előnye, hogy egyszerűen, igen gyorsan elvégezhető, és érzékeny, szelektív és megbízható kimutatást tesz lehetővé. A találmány szerinti szintetikus táptalajok stabilok, hosszú időn át eltarthatok, és azokon a Pseudomonas aeruginosa lényegesen jobban növekedik, mint az ismert, gátló anyagként nitrofurantoint vagy cetrimidet tartalmazó táptalajokon. A találmányt az oltalmi kör korlátozása nélkül a következő példákban részletesen ismertetjük. 1. példa A következő összetételű folyékony táptalajt állítjuk elő: acetamid 3 g (0,068 mól/dm3) KH2PO4 2 g (0,018 mól/dm3) K2HPO4 5 g (0,029 mól/dm3) MgS04 x 7 H2O 0,1 g (0,00041 mól/dm3) KN03 1 g (0,01 mól/dm3) NaaS203 x 5 H2O 2 g (0,0081 mól/dm3) desztillált víz 1000 cm3 Felhasználás előtt a folyékony táptalajt 10 emsénként erjesztési csövet tartalmazó steril kémcsövekbe fejtjük le, majd a csöveket mintegy 45°-os szögben megdöntve áramló gőzben hókezeljük. 2. példa A következő összetételű, folyékony táptalaj készítésére alkalmas szilárd táptalajt (.premixef) állítjuk elő: acetamid 3 g (0,068 mól) KNOs 1 g (0,01 mól) Na2Sz03 x 5 H2O 2 g (0,0081 mól) Folyékony táptalaj készítése céljából a fenti összetételű porkeveréket 1 dm3 desztillált vízben oldjuk. Kívánt esetben az igy kapott folyékony táptalajhoz 30 cm3 Polyoxethenum 1540 detergenst (1540-es polimerizációfokú polietilénglikolt) adunk. 3. példa A következő összetételű szilárd táptalajt állítjuk elő: acetamid MgS04 x 7 H2O KzHP04 K2SO4 3 g (0,068 mól/dm3) 0,1 g (0,00041 mól/dm3) 1,0 g (0,0058 mól/dm3) 1»0 g (0,0058 mól/dm3) agar-agar 16 g desztillált víz 1000 cm3 A táptalajt 100 °C hőmérsékleten gőzzel kezeljük, majd steril Petri-csészékbe öntjük. 5
