201338. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azokat tartalmazó gyógyászati készítmények elöállítására
9 HU 201338 B 10 Boc-O-benzil-Thr-el hat külön ciklust végzünk el (1,5 g, 5 mmól, 60 perc, kétszer), Boc-Met (1,25 g, 5 mmól, 30 perc, kétszer), Boc-Nin-Trp(CHO) (1,7 g, 5 mmól, 30 perc, kétszer), Boc-(D)-Ala (950 mg, 5 mmól, 30 perc), Boc-Nle (1,15 g, 5 mmól, 60 perc) és Boc-2,6-diklór-benzil-Tyr (2,2 g, 5 mmól, 30 perc, kétszer). A Boc-védőcsoport eltávolítását és a gyanta acetilezését az 1. példa szerint elvégezve 5,2 g acetilezett heptapeptidgyantát kapunk. A termék hasítását dimetil-szulfidot tartalmazó fluor-hidrógénsavval és p-krezollal történő kezeléssel, az 1. példa szerint végezzük el. A gyantát dietil-éterrel és etil-acetáttal mossuk, négyszer 15 ml 30%-os ecetsavval kezeljük, szűrjük és liofilizáljuk. 80 mg nyers pepiidet kapunk, amelyet preparativ HPLC kromatográfiával, az 1. példában leírt eljárással analóg módon tisztítunk. 50 mg nemszulfatált peptidet kapunk, kitermelés: 5,36%. 10 mg Ac-Tyr-Nle-(D)Ala-Trp(CHO)-Met-Thr-(NCHa-Phe)-NH2-t PAS-el reagálhatunk, majd preparativ HPLC úton az 1. példában leírt módon tisztítjuk. 8 mg Ac-Tyr(S03H)-Nle-(D)Ala-Trp(CH0)-Met-Thr(S03H)-(NCH3- -Phe)-NH2-t kapunk, kitermelés: 70%. UV spektrum: 0,12 mg peptid 1 ml 0,1 n kálium-hidroxid-oldatban X«ax 272 nm: £ = 4500 A«a* 279 nm: £ = 4600 Xmax 288 nm: £ = 3880 IR spektrum: mikro KBr pellet 3300 cm-1: széles OH + NH 1665 cm*1: amid és karbonil 1530 cm*1: amid II 1200 cm*1: szulfát 4 4. példa 2 mg, a 3, példa szerint előállított terméket a 2. példában ismertetett eljárással analóg módon kezelünk. 1,8 mg Ac-Tyr(S03H)-Nle-(D)Ala-Trp-Met-Thr(S0aH)-(NH3- -Phe)-NH2-t kapunk, kitermelés: 93%. UV spektrum: 0,17 mg peptid 1 ml 0,1 n kálium-hidroxid-oldatban X«ax 271 nm: £ = 5075 Xmax 279 nm: £ = 5100 Xaax 288 nm: £ = 4000 IR spektrum: mikro KBr pellet 3301 cm*1: széles OH + NH 1650 cm*1: amid és karbonil 1527 cm*1: amid II 1570 cm*1: tirozin 1200 cm*1: szulfát 2,4 g (0,384 millimól), az 1. példa szerint előállított Boc-(NCH3-Phe) gyantát az 1. példában ismertetett szilárdfázisú szekvenciális szintézisnek vetünk alá. A 16. és 20. lépésben az aktivált aminosavakat a megfelelő reakcióidőkkel adunk hozzá: Boc-O-benzil-Thr-t hat különböző ciklusban (1,5 g, 5 mmól, 60 perc; 1,5 g, 5 mmól, 30 perc), Boc-Met (1,25 g, 5 mmól, 30 perc, kétszer), Boc-N“1- -Trp(CHO) (1,7 g, 5 mmól, 30 perc, kétszer), Boc-Ala (0,95 g, 5 mmól, 30 perc), Boc-Met (1,25 g, 5 mmól, 30 perc, kétszer) és Boc-2,6-diklór-benzil-Tyr (2,2 g, 5 mmól, 30 perc, kétszer). A Hoc-védöcKoporl. eltávolítása és a gyanta acetilezése után az 1. példában leirt módon 3,0 g acetilezett heptapeptidgyantát kapunk. A gyantát hasítjuk, mossuk, ecetsavval kezeljük, szűrjük és liofilizáljuk. 100 g nyers peptidet kapunk, amelyet az 1. példában leírt HPLC módszerrel tisztítunk. 25 mg nemszulfatált peptidet kapunk, kitermelés: 6,6%. 12 mg Ac-Tyr-Met-Ala-Trp(CHO)-Met-Thr-(NCH3-Phe)-NHa-t PAS-el kezelünk és tisztítunk, az 1. példában leírt módon. 9,8 mg Ac-Tyr(S03H)-Met-Ala-Trp(CHO)-Met-Thr(S03H)-(NCH3-Phe)-NH2-t kapunk, kitermelés: 70%. UV spektrum: 0,24 mg peptid 1 ml 0,1 n kálium-hidroxid-oldatban Xnajc 272 nm: £ = 5350 Xnax 279 nm: £ = 4445 Xnax 288 nm: £ = 3730 IR spektrum: mikro KBr pellet 3389 cm*1: széles OH + NH 1659 cm*1: amid és karbonil 1521 cm*1: amid II 1507 cm*1: tirozin 1250 ) ) cm*1: szulfát 1230 ) 5. példa 6. példa 2 mg, az 5. példa szerint előállított terméket a 2. példában leírt módon kezelünk. 1,9 mg Ac-Tyr(S03H)-Met-Ala-Trp-Met-Thr(S03H)-(NCH3-Phe)-NH2-t kapunk, kitermelés: 95%. UV spektrum: 0,19 mg peptid 2 ml 0,1 n kálium-hidroxid-oldatban Xaax 272 nm: £ — 5300 Xnax 279 nm: £ = 5430 Xnax 288 nm: £ = 4600 IR spektrum: mikro KBr pellet 3310 cm*1: széles OH + NH 1658 cm"1: amid és karbonil 1521 cm*1: amid II 1508 cm*1: tirozin 12521 12321cm*1: szulfát 1046) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
