201332. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfortartalmú 2-izoxazolinok és -izoxazolok, valamint ilyen vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
61 HU 201332 B 62 Az alábbiakban a 34. példa szerint előállított vegyülettel végzett kísérletek eredményeit ismertetjük. 7. Listeria monocytogenes által fertőzött egerek késleltetett típusú hiperszenzitlv bőrreakciójára kifejtett hatás Ebben a vizsgálatban a listeria monocytogenes baktérium ellen kifejtett specifikus, sejtes közvetitésű. immunitást vizsgáltuk a késleltetett típusú hiperszenzitlv reakció segítségével. Nőstény Naval Medical Research Institute eredetű egereket 2 x 102 élő baktériummal fertőztünk, majd az állatokat 10-10 egeret tartalmazó csoportokra osztottuk. Ugyanezen a napon kezdtük el az állatok 0,1, 1 illetőleg 10 mg/kg dózisú intraperitoniális kezelését a vizsgálati anyaggal. A kezelést 2, 4 éB 6 nap múlva megismételtük. Egy negyedik csoportba tartozó fertőzött állatok a vizsgálati anyag helyett csupán vivőanyagot kaptak, s ezek szolgáltak pozitív kontrollként. A 13. vizsgálati napon a késleltetett típusú reakció kiváltását Listeria monocytogénból nyert oldható antigénnel végeztük, amelyet az állatok lábába injekcióztunk. A 10 nem fertőzött állatból álló 5. vizsgálati csoport, az úgynevezett negatív kontroli-csoport állatait ugyancsak antigénnel kezeltük, hogy így az antigénprovokáció nem specifikus reakcióit kizárjuk. 24 órával az antigén beadását követően a késleltetett típusú hiperszenzitlv reakció mértékéül szolgáló %-os lábduzzadást meghatározzuk. A 12. táblázatban összefoglalt vizsgálati eredmények azt mutatják, hogy a vizsgálati anyag a késleltetett típusú reakciót és ezzel a sejtes közvetitésű immunitást a dózistól függően és az 1 mg/kg dózistól kezdődően szignifikánsan erősíti. 12. táblázat Listeria monocytogen elleni késleltetett típusú hiperszenzitlv reakcióra kifejtett hatás Vizsgálati Dózis Késleltetett típusú csoport mg/kg reakció %-os 4x i.p. talpduzzadás Negatív kontroll 0.8 ± 1.8 Pozitív kontroll 9.8 ± 6.4 A 34. példa szerin-0.1 13.3 ± 9.7 ti vegyü-1.0 15.0 ± 7.0 lettel ke-10.0 19.2 i 9.4* zeit csoport Ugyanilyen vizsgálati módszerrel határoztuk meg a vizsgálati anyag 10 mg/kg dózisú i.p. kezelés melletti késleltetett típusú hiperszenzitlv reakcióra kifejtett hatását Naval Medical Research Institute eredetű nőstény egereken, amelyeket különböző mennyiségű Listeria monocytogénnel fertőztünk. Az állatokat vagy 2 x 102 vagy 5 x 102 csirával kezeltük. Az eredményeket a 13. táblázat tartalmazza. A késleltetett típusú hiperszenzitiv reakció a vizsgálati anyag hatására ugyan mindkét csira-koncentráció mellett erőteljesebb lett, mégis ez a stimuláló hatás a kisebb csiraszámmal fertőzött állatcsoportnál erőteljesebb. 13. táblázat Listeria monocytogen-nel fertőzött egerek késleltetett típusú hiperszenzitlv reakciójára kifejtett hatás vizsgálata Kezeléshez alkalmazott csiraszám Kísérleti állatcsoport Késleltetett típusú reakció %-os talpduzzadás 2 xlO2 Pozitív kont-11.3 ± 15.3 roll-csoport Dózis-csoport* 30.9 ± 15.3 5 x 102 Pozitív kont-12.3 ± 11.5 roll-csoport Dózis-csoport* 17.9 ± 12.1 * 4 x 10 mg/kg i.p. 34. példa szerinti vegyület 8. Listeria monocytogén-nel fertőzött egerek mortalitására és a szervek fertőzöttségére kifejtett hatásának vizsgálata 10 Naval Medical Research Institute eredetű nőstény egeret tartalmazó csoportok állatait 2 x 102 Listeria monocytogent tartalmazó alacsony dózissal fertőztünk. Ez a menynyiség az állatok számára szubletális dózist jelent, vagyis a fertőzéstől nem pusztulnak el, azonban az előzőekben ismertetett módon specifikus sejtes közvetitésű immunitás alakul ki náluk, amely az (I) általános képletű vegyületek hatására erősödik. A kísérlet során azt vizsgáltuk, hogy 15 nappal az első fertőzés után Listeria monocytogen baktériummal végrehajtott második fertőzés 106 csiraszámmal hogyan hat a betegség lefolyására. A 14. táblázatból látható, hogy a kontroll-csoport 10 állata közül 4 elpusztult és a 6 túlélő állat (100%) mája 5 nappal a második fertőzés után Listeria monocytogénekkel volt fertőzött. Ugyanakkor a dózis-csoport állatai, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 Szignifikancia p <0,05 (Studen t-teszt) 33
