201297. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenil-karbamátok, és e vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 201297 B kolin-észteráz gátlásának in vivo egéren vizsgáljuk, szubkután vagy orális adagolás után. Az állatokat a vizsgálandó vegyületek beadása után különböző időpontokban, 0,25-8 óra közötti intervallumban leöljük. Az agyat gyorsan eltávolítjuk, az acetil-kolin-észteráz enzimet extraháljuk, és 0,1% Tritonnal szolubilizáljuk, majd acetil-kolint hidrolizáló képességét az in vitro kísérletnél fent leírt módon meghatározzuk, normál sóoldattal injektált egérből eltávob'tott enzimmel összehasonlítva. Az (1) általános képletű vegyületek aktivitása általában 2- 90%-a a fizostigminének, de 3 óra múlva is jelentős. Akut toxiciiás vizsgálata Minden egyes vegyületet legalább három különböző dózisban adunk az egereknek, orálisan vagy szubkután módon, csoportonként (dózisonként) legalább 10 állatnak. Meghatározzuk minden egyes dózisnál azoknak az állatoknak a számát, amelyek az adagolást követően 3 óra alatt elpusztultak. Az így kapott adatokból kiszámítjuk az LD50 értéket, azaz azt a dózist mg/kg-ban kifejezve, amely az állatok 50%-ában pusztulást okoz. A fenti kísérletet megismételjük úgy, hogy az 9 állatokat előzőleg atropin-szulfáttal kezeljük, ami mind a perifériális, mind a cetrális muszkarin-receptorokat blokkolja. A fenti kísérletek adataiból kiszámíthatjuk a karbamátok relatív toxicitását, 5 amely a muszkarin-receptorok túlzott aktiválásából, és a fenti gátlószerre érzéketlen légzőszervi izmok bénulásából származik. Az egyes dózisok adagolása után feljegyezzük a mellékhatások gyakoriságát és mértékét is, legala- 10 csonyabb dózistól kezdve, amely jelentősebb (20%nál nagyobb) gátlást okozott a teljes agyi acetil-kolin-észteráz aktivitásában. Opiátok aluszékonyságot okozó és légzési dep- 15 resszáns hatásának atUagonizálása Az (I) általános képletű karbamátot különböző dózisokban intravénásán morfinnal együtt injektáljuk nyulakba. A haóanyagok beadása előtt is utána 4-5 órán át folyamatoan mérjük a légzés ütemét, az 20 arteriális vér gáz-tenzióját és pHját. Másik kísérletsorozatban az anti-kolin-észteráz hatású vegyületek hatását vizsgáljuk az opiátok analgetikus hatására, nyulakban, fájdalominger alkalmazása - például az ülőideg elektromos ingerlése - után. 10 1. táblázat: In vitro aktivitás szolubilizált egéragy enzimen /(I) általános képletben R4 = Rs = -CHV Vegyület jelölése R2 Rí Olvadáspont (°C) IC5 (mól/1) Csúcsaktivitás ideje (perc) fizostigmin H metil l.lxlO'8 30 (szalicilét) miotin.HCl metil H 1,3x10^ 30 RA^.HCl H etil 167-170 4,0xl0'7 120 RA15.HCI H n-propil 141-143 l.lxlO'7 120 RAm.HCI H aim 147-152 4,3xl0"7 120 RA13.HCI H izopropil 146-148 l,2xl0'5 120 RA5.HCI H n-butil 158-162 7,6xlO‘S 120 RA12 H ciklohexil 75-77 93X10-8 120 RA10.HCI-ch3 metil 145 2,7xl0'8 120 RA7.HCI-ch3 etil 135-136 l,3xl0‘6 90 RAs.HCl-C2H5 etil 137-138 2,0xl0'5 3,5xl0'5 30 RAn-HCl** morfolino amorf 30 RA4 .HCI-ch3 propil 148-149 l^xlO"6 60 * : adatok a szabad bázis formára vonatkoznak, amely a reakcióelegyből a hidrogén-klorid hozzáadása előtt kicsapódik * * : Rf értéke 0,59 (95 rész etil-acetát és 5 rész 33 tömeg%-os etanolos dimetil-amin-oldat elegyében) 2. táblázat: Egéragy anti-kolin-észteráz aktivitás, a fizostigmin aktivitásához viszonyítva Vegyület jelölése Relatív aktivitás fizostigminhez viszonyítva, szubkután adagolás esetén Relatív aktivitás fizostigminhez viszonyítva, orális adagolás esetén Kolin-észteráz gátlás (%) szubkután adagolás után 3 órával fizostigmin 100 100 0 miotin 100 300 5 RAó 11 19 35 RA15 33 32 37 RAl4 15 22 35 RAn 2 5 — RA5 36 29 30 6
