201094. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns acil-tripeptidek és az azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
9 HU 201094 B 10 Ily módon világossárga színű szirup formájában 84,5 g nyersterméket kapunk. E nyerstermék egy 30,0 g súlyú részletét egy 1500 g finom szemcseméretű szilikagéllel töltött gyors-kromatográfiás oszlopon kromatog- 5 rafáljuk, eluensként etil-acetát és hexán 1:1,5 arányú elegyét használjuk. A kromatografálást vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel követjük, szilikagél lemezeken, eluens: etil-acetát és hexán 1:1 arányú elegye, 10 a lemezeket úgy hívjuk elő, hogy 10X-os etanolos foszfor-molibdénsav-oldattal befújjuk, majd megmelegitjük azokat; a termék Rf-értéke: 0,41. A kizárólag tiszta terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az oldó- 15 szert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon színtelen, szilárd anyag formájában 10,95 g cim szerinti vegyületet kapunk, hozam: 37X. ,3C-NMR-spektrum (CDCb), ppm: 20 172,9, 170,6, 170,1 (amid, észter-karbonil), 156,1 (kar barnát-kar bonil), 136,2, 128,5, 128,2, 128,1 (aromás), 81,7, 67,2, 52,3, 51,4, 48,2, 37,5, 28,0, 18,0. 25 lH-NMR-spektrum (CDCb), delta: 1,37 (3H, d, alanil-CH3), ABX-rendszer, Ha, és Hb multiplettekkel (2H, aszpartil metilén-protonok): súlypontja: 2,62 és 2,90, Hx beleolvad a 30 4,5-4,63 közötti multiplettbe (2H, aszpartil- és alanil metinprotonok); 3,72 (3H, s, -CO2CH3), 5,14 (2H, m, benzil-protonok), 7,35 (5H, m, aro- 35 más). A fenti eljárás nagyítása során 145 g (0,449 mól) benziloxi-karbonil-L-aszparaginsav-ß-tercier—butil-észterból, 60,7 g (0,449 mól) 1-hidroxi-benzotriazolból, 41,0 ml 40 (37,72 g, 0,374 mól) N-metil-morfolinból, 52,19 g (0,374 mól) D-alanin-metil-észter-hidrokloridból és 200 g (0,449 mól) 1-ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimid-meto-p-toluol-szulfonátból kiindulva sárga színű szirup 45 formájában 160,9 g nyersterméket kapunk. Ennek a nyersterméknek a teljes mennyiségét feloldjuk 1,5 1 diklór-metánban, és hozzáadunk 170 g, 32-63 mesh szemcseméretű szilikagélt. Az elegyet erélyesen összerázzuk, 50 majd csökkentett nyomáson megszáritjuk. A szilikagélre adszorbeált nyersterméket felvisszük egy 1 kg szilikagéllel töltött kromatografáló oszlopra, a minta felviteléhez etil-acetát és hexán 1:2 arányú elegyét használ- 55 juk. Ezután az oszlopot etil-acetát és hexán 1:2 arányú elegyével eluáljuk, és a frakciókat vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel vizsgáljuk. Ily módon viaszszerű, szilárd anyag formájában 140,2 g (hozam: 92X) tisz- 60 ta, cím szerinti vegyületet kapunk. 2. példa oC-(L)-Aszpartil-D-alanin-metil-észter-0-Lercier-butil-észter 62,5 g (0,153 mól) benziloxi-karbonil-oC-(L)-aszpartil-D-alanin-metil-észter-0-tercier— -butil-észter 950 ml vízmentes metanollal készült elegyét 63 g csontszenes palládium-hidroxid (Pearlman-féle katalizátor: 20X palládium-hidroxidot és 31X vizet tartalmaz) jelenlétében, 3,5 • 105 Pa nyomáson, 20 °C hőmérsékleten, 5 órán ét egy Parr-féle készülékben hidrogénezzük. Utána a katalizátort kiszűrjük, és kétszer 500 ml metanollal mossuk. A szűrletet és metanolos mosófolyadékot egyesitjük, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Az így kapott olajos nyersterméket feloldjuk 1 1 etil-acetátban, az oldatot először 500 ml 5X-os, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd 500 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton megszáritjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon színtelen olaj formájában 29,6 g (hozam: 70X) cim szerinti vegyületet kapunk. tH-NMR-spektrum (60 mHz, CDCb), delta: 1,39 (3H, d, J=7 Hz), 1,45 (9H, s), 2,3-2,8 (2H, m), 3,5-3,8 (1H, részben elfedett m), 3,72 (3H, s), 4,52 (1H, m), 7,75 (széles, d). 3. példa Heptanoil-gamma-D-glutamil-cC- benzil-észter-cC-(L)-aszpartil-oC-D-alanin-iaetil-észter-0- -tercier-butil-észter 13,91 g (39,8 mmól) heptanoil-gamma-D-glutaminsav-oC-benzil-észtert, 9,10 g (33,0 mmól) oC-(L)-aszpartil-D-alanin-metil-észter-ű-tercier-butil-észtert, 5,38 g (39,8 mmól) 1- -hidroxi-benzotriazolt és 17,75 (39,8 mmól) 1- -ciklohexil-3- ((2-morf olino-etil )-karbodiimid-meto-p-toluol-szulfonátot a fenti sorrendben, 0-5 °C hőmérsékleten hozzáadunk 396 ml vízmentes diklór-metánhoz. Az elegyet 20 órán át 20 °C hőmérsékleten keverjük, majd 300 ml diklór-metánnal hígítjuk, és először 1 1 5%-os, vizes sósavval, utána 1 1 telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, és végül 1 1 vízzel mossuk. Ezután a szerves részt vízmentes nátrium-szulfáton megszáritjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson le desztillál juk. Az Így kapott, 21,7 g súlyú, olajos nyersterméket 1700 g 32-63 mesh szemcseméretű szilikagélen kromatografáljuk, eluensként etil-acetát és hexán 3:1 arányú elegyét használjuk. Vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálattal megállapítjuk, hogy mely frakciók tartamazzák a kívánt terméket, a vizsgálatot szilikagél lemezeken végezzük, eluens: etil-acetát és hexán 3:1 arányú elegye, a lemezeket úgy hívjuk 7
