201094. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns acil-tripeptidek és az azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
n HU 201094 B elő, hogy 10%-os etanolos foszfor-molibdénsav-oldattal befújjuk, majd megmelegitjúk azokat. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Az így kapott színtelen, szilárd maradékot feloldjuk 400 ml etil-acetétban, az oldatot kétszer 400 ml 1 normál, vizes nétrium-hidroxid-oldattal, majd 400 ml vízzel mossuk (nyomnyi mennyiségű szennyezés eltávolítása céljából), utána vízmentes nátrium-szulfáton megszáritjuk, és az oldószert ledesztilláljuk. Ily módon amorf, színtelen szilárd anyag formájában 6,27 g (hozam: 31%) tiszta, cím szerinti vegyületet kapunk, vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke: 0,68 (szilikagél lemezen, eluens: etil-acetát és hexán 1:1 arányú elegye, a lemezeket úgy hívjuk elő, hogy 10%-os etanolos foszfor-molibdénsav-oldattal befújjuk, majd megmelegitjük azokat). 13C-NMR-spektrum (CDCh), ppm: 173.4, 172,9, 172,1, 172,0, 170,8, 170,2 (karbonilok), 135,3, 128,6, 128.4, 128,3 (aromás), 67,2, 81,6, 52,2, 51,5, 49,4, 48,3 (-CO2CH3 és az aminosavak aszimmetriás szénatomjai), 36,9, 36,4, 32,0, 31,5, 28,9, 28,0, 25,5, 22,4, 17,6, 14,0. Hl-NMR-spektrum (CDCh): multiplettek: delta: 0,83 és 1,1-1,7 [H, CH3(CH2)4- és glutamil C-3 metilén-protonok), 1,34 (3H, d, J=7 Hz), alanin CH3-), 1,40 19H, s, -C(CH3)3], átfedő roultiplettek 2,1-2,4 (4H, heptanoil 02 és glutamil 04 metilén-protonok), ABX-rendszer a Ha multiplett súlypontja: 2,57 (1H), a Hb multiplett súlypontja: 2,78 (1H), a Hx multiplett súlypontja: 4,47 (1H), Jab=- 15 Hz, JaxäJbx=6 Hz, aszpartil metilén- és metin-protonok, 7,30 (5H, m, aromás). 4. példa Heptanoil-gamma-D-glutamil-oC-benzil-észtet— -cC-L-aszpartil-D-alanin-metil-észter 6,13 g (10,0 mmól) heptanoil-gamma-D-glutamil-oC-benzil-észter-oC-(L)-aszpartil-D-alanin-metil-észter-á-tercier-butil-észtert feloldunk 10,1 ml, vízmentes dioxánnal készült, 5 normál sósav-oldatban, és az elegyet másfél órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, a maradékot feloldjuk 300 ml etil-acetátban, és az oldatot 350 ml telitett, vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal kirázzuk. Az elválasztott vizes részre 450 ml tiszta etil-acetátot rétegezünk, és az elegy pH-jét 6 normál, vizes sósav adagolásával 1,5-re állítjuk, eközben az elegy számottevő mértékben habzik. A pH beállítása után a szerves és vizes részt alaposan összekeverjük, majd a vizes részt elválasztjuk, és további kétszer 350 ml etil-acetáttal kirázzuk. Az egyesített etil-acetátos részeket 600 ml vízzel mossuk, vízmentes nátriuro-szulfáton megszáritjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon színtelen, habos anyag formájában 4,52 g (hozam: 82%) cím szerinti vegyületet kapunk, vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke=0,23 (szilikagél lemezen, eluens: ecetsav, etil-acetát, n-butanol és víz 1:1:1:1 arányú elegye, a lemezeket úgy hívjuk elő, hogy 10%-os etanolos foszfor-molibdénsav-oldattal befújjuk, majd megmelegitjük azokat. 13C-NMR-spektrum (CD3OH), ppm: 176,3, 174,7, 174,4, 173,8, 173,1, 172,7, 53,2, 52,8, 51,1. m-NMR-spektrura (CD3OD): multiplettek: delta: 0,9 és 1,2-1,7 (13H, CH3(CHz)«- és glutamil C-3 metilén-protonok), 1,37 (3H, d, J=7 Hz), alanin CH3-); két multiplett 2,2-2,4 (4H, heptanol C-2 és glutamil C-4 metilén-protonok); ABX-rendszer, a Ha multiplett súlypontja: 2,65 (1H), a Hb multiplett súlypontja: 2,84 (1H), a Hx multiplett súlypontja: 4,80, Jab=18 Hz, Jaz -ö Jbx=6 Hz, aszpartil metilén- és metin-protonok; 3,68 (3H, s, -CO2CH3); két átfedő multiplett 4,36-4,53 (2H), glutamil és alanil metil-protonok. 12 5. példa Ifi-[Heptanoil-gamma-D-glu tamil-cC-benzil-észter-0-(L)-aszpartil-oC-D-alanin-metil-észter]lfi-benziloxi-karbonil-D-2,3-diamino-propionsav-benzil-észter 3,78 g (0,0138 mól) N^benziloxi-karbonil-D- 2,3- diami no- propionsav- monohidroklorid 795 ml vízmentes diklór-metánnal készült, és jeges fürdőben tartott oldatához hozzáadunk először 5,43 g (9,88 mmól) heptanoil-gamma-D-glutamil-cC-benzil-észter-oC-(L)-aszpartil-D-alanin-metil-észtert, ezután 1,80 ml (16,4 mmól) N-metil-morfolint, ezután 1,45 g (10,7 mmól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 3,84 g (9,1 mmól) l-ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimid-meto-p-toluol-szulfonátot. Ezután a hűtófürdót eltávolítjuk, és a reakcióelegyet 17 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána a szerves részt kétszer 111 normál, vizes sósavval mossuk, ennek során mindkét réteg emulziót képez. Az emulziót úgy törjük meg, hogy az emulziós részeket végül 1 1 vízzel mossuk. Ezután a szerves részt kétszer 1 1 1 normál, vizes nátrium-hidroxid-oldattal mossuk. Ebben az esetben is, a vizes rész tiszta részének elválasztása után az emulziós részt 1 1 vízzel mossuk. A szerves részt vízmentes magnézium-szulfáton megszáritjuk, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékot csök5 10 15 20 25 30 35 40 45 5C 5f 6C 65 8
