201074. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mitomicin-A-analógok előállítására
7 HU 201074 13 8 A reakcióelegyet további egy órán át keverjük, hogy a toluidín teljes elreagálását biztosítsuk. Ezután a p-tolil-diazónium-klorid oldatát tömény, vizes nátrium-karbonáttal 6,8- -7,2 pH-értékre állítjuk be 0 °C-on, miközben az oldat vörösből narancsszínűvé válik, és kis mennyiségű csapadék válik ki. A hideg, semleges oldatot csepegtető tölcsérbe helyezzük és 150 g nátrium-karbonát, 300 ml 30-35%-os vizes metil-amin (2. megjegyzés) és 100 g aprított jég 3 1-es lombikban erősen kevert elegyéhez adjuk, lassú áramban. A reakcióelegy hőmérsékletét körülbelül -10 °C értéken tartjuk a beadagolás közben, ami körülbelül 45 percet igényel (3. megjegyzés). A reakcióelegyet háromszor, a térfogatával azonos mennyiségű éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumokat vízmentes nátrium-szulfáton megszárítjuk, és szobahőmérsékleten rotációs bepárlón bepároljuk. 65 g nyers l-metil-3-(p-tolil)-triazént kapunk (4. megjegyzés). Ezt vizzel hűtött szublimáló berendezésbe helyezzük és a triazént 30 °C-on 133,3 Pa nyomáson szublimáljuk. 43,3 g (0,29 mól, 62%) sárga kristályos szublimátot kapunk; o.p.: 77-80 °C (5. megjegyzés). A szublimátum hexánból átkristályositható és fehér tűkristályos triazén állítható elő; o.p.: 80,5-81,5 °C. Előnyösebben a szublimátumot minimális mennyiségű éterben oldjuk és kétszeres térfogatú hexánt adunk az oldathoz, majd 0 °C-ra hűtjük, fehér csapadékréteget kapunk sárgás színeződéssel; o.p.: 79-81 °C. A tiszta triazén-termelés 33- -37 g (47-53%), (6. megjegyzés). M egjegyzések: 1. A keményítő - kálium-jodid próbákat a kálium-nitrit beadagolás leállítása után 1-2 perccel kell elvégezni. 2. 40% vizes metil-aminnal helyettesíthető. 3. A reakció befejeződött, amikor a reakcióelegy cseppje vizes nátrium-karbonátos béta-naftol-oldatban nem ad piros szint. 4. A fő szennyeződés l,5-di-(p-tolil)-3--metil-l,4-pentazadién (o.p.: 148 °C). Ez frakcionált kristályosítással eltávolítható, de az elegyból a triazén kiszublimálása egyszerűbb. 5. A szublimát nyomnyi l,3-di-(p-tolil)-triazént tartalmaz, amint ez vékonyréteg-kromatográfiás analízissel kimutatható. Átkristályosítással tiszta 1-metil-3-(p-tolil)-triazén kapható. 6. Az eljárás csak vízben oldható aminokkal megy jól végbe. Az alább leirt 2. előállítás jobban alkalmazható vízben nem oldódó aminok esetében. 2. előállítás E. H. White és munkatársainak, a Tetrahedron Letters, No. 21, p. 761 (1961) irodalmi helyen leírt eljárása: l-(n-Butil)-3-(p-klór-fenil)-triazén 2,87 g (10,1 mmól) aceton-metanol-oldószerelegyböl átkristályosított p-klór-fenil-diazónium-hexafluor- foszfát dimetil-amintól mentes, dimetil-formamidban készült oldatát -5 °C-on, lassan 0,73 g (10,0 mmól) butil-amin, 15 g porított nátrium-karbonát és 30 ml dimetil-formamid elegyéhez adagoljuk. A diazóniumsó keverés közbeni adagolását végezhetjük szobahőmérsékleten is, de tisztább termék kapható, amennyiben a diazóniumsót egy külön elválasztó tölcsérben -5 °C-on készítjük és innen használjuk a reakcióhoz. A reakcióelegyet ezután 0 °C-ra melegítjük és addig keverjük, amíg 2-naftollal negatív próbát kapunk (rendszerint néhány perc elegendő). Ezután étert adunk az elegyhez, a reakcióelegyet leszűrjük, a szűrletet vízzel mossuk és megszáritjuk. (A triazént ezen a ponton izolálhatjuk és pentánból, alacsony hőmérsékleten átkristályosíthatjuk.) 3. előállítás 7-Hidroxi-9a-me toxi-mitozán 2,2 g (6,6 mmól) mitomicin-C-t oldunk 140 ml 0,1 n nátrium-hidroxidban (50%) és a reakcióelegyet 30 órán ót szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot 1 n sósav segítségével körülbelül 4,0 pH értékűre állítjuk be, és etil-acetáttal (4 x 500 ml) extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatot nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban 30-35 °C-on bepároljuk. Szilárd maradékot kapunk, amelyet éterben oldunk és felesleg hexánnal kezelünk. így biborszinű csapadékot kapunk, amelyet leszűrünk és megszáritunk, finom, biborszinű por-terméket kapunk (1,4 g, 63%). 1H-NMR (piridin-d5, delta): 2,05 (s, 3H), 2,14 (széles s, 1H), 2,74 (széles s, 1H), 3,13 (d, 1H), 3,24 (s, 3H), 3,56 (d, 1H), 4,00 (dd, 1H), 4,37 (d, 1H), 5,05 (t, 1H), 5,40 (dd, 1H), 5,90 (széles s, 2H). 4. előállítás Mitomicin-A 100 mg (0,30 mmól) 7-hidroxi-9a-metoxi-mitozánt és 100 mg (0,67 mmól) l-metil-3-(p-tolil)-triazént oldunk 2 ml diklórmetán és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
