201029. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új triazol-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó antifungális hatású gyógyászati készítmények előállítására
HU 201029 B A következőkben a találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek gyógyáismertetjük. Az S. táblázatban in vitro aktivitási értékeket adunk meg a kísérleti vegyületnek az élesztőgombák és gombák növekedését gátló minimális koncentrációjában (MIC-értékében) kifejezve. A kísérletekhez használt organizmusokat, a Candida albicans ATCC 11651 és Aspergillus fumigatus ATCC 28214 organizmusokat a Bezjak V. által a J. Clinical Micro., 21.509-512 (1984) szakirodalmi helyen ismertetett módon 10' organizmus/ml koncentrációra standardizáljuk, majd -70 °C-on tartjuk felhasználásig. A kísérleti vegyülclcket dimetil-szulfoxidban (DMSO) szolubilizáljuk, majd úgynevezett Eagleús Minimum Essential Medium (EMEM) táptalajjal 200 gg/ml végső koncentrációra hígítjuk. Az összehasonlító anyagként használt, ismert antifungális ágensek törzsoldatait -70 °C-on tároljuk és a szükség szerint EMEM segítségével hígítjuk. Az in vitro kiértékelési módszer a Polonelli, L. és Morace. G. által a Mycopathologia, 86. 21-28 (1984), illetve Hughes, C. és munkatársai által az Antimicrob. Aq. and Chemo., 25,560-562 (1984) szakirodalmi helyen ismertetett, úgynevezett mikrotiter-táptalajos hígítási módszer. A kísérleti vegyületekből sorozathígítást készítünk EMEM segítségével úgy, hogy fokozatosan csökkenő koncentrációkat állítunk be 100 pg/ml és 0,4 (j_g/ml között. Megfelelő üregeket beoltunk az adott kísérlethez szükséges organizmussal (a C. albicans esetében l.lOr organizmus/ml és az A, fumigatus esetében 5.10s organizmus/ml arányban) és a kísérleti rendszert 30 °C-on 24 órán át inkubáljuk. A gombanövekedés mértékét az 540 nm-nél mérhető optikai sűrűség alapján, Flow MCC márkanevű pásztázó spektrofotométert használva állapítjuk meg, és a MIC-értékeket a Grenta, V. és munkatársai által az Antimicrob. Ag. and Chemo., 22.151-153 (1982) szakirodalmi helyen ismertetett módszerrel határozzuk meg. A 6. táblázatban a kísérleti vegyületek in vivo aktivitásának vizsgálata során kapott eredményeket adunk meg, éspedig megállapítjuk a kísérleti vegyületet vagy ismert összehasonlító vegyületet kapott kísérleti állatok százalékos túlélését kezeletlen fertőzött kontrollcsoporthoz viszonyítva. Az in vivo kísérletekhez Barnes, J. és munkatársai által a Láb. Investigation, 49,460-467 (1963) szakirodalmi helyen, illetve a Rogers, T. és Balish, E. által az Infection and Immunity, 14.33-38 (1976) szakirodalmi helyen ismertetett olyan krónikus szisztémikus fertőzések kerülnek felhasználásra, amelyek következtében a fertőzéstől számított 7 napon belül a kísérleti állatként használt egerek elpusztulnak.-70 °C-on tartott fagyasztott törzstenyészetből (109 organizmus/ml) Candida albicans 11651 organizmust konyhasóoldattal 1.10' organizmus/ml koncentrácóra hígítjuk és a hígításból 0,2 ml-re intravénásán (farokvéna) beoltunk 20 g-os Charles River CF-1 törzsbeli nőstény egeret. A kísérleti vegyületeket rendszerint 0,25 vegyes%-os metil-cellulóz (Methocel márkanevű) ol19 datban szolubilizáljuk, de a nehezen szolubilizák dó vegyületekhez 10 vegyes%-os Emulophor-okktot (A GAF Corp. EL620jelzéssel szállított terméke) használunk. Ismert összehasonlító vegyületként amphotericin B (Fungizone márkanevű termék) vizes oldatát és ketoconazola (Nizoral márkanevű) Methocel-es oldatát adagoljuk 1,0 mg/kg/nap, illetve 150 mg/kg/nap dózisban. Primer kísérletben 10-10 állatból álló csoportokat megfertőzünk C. albicans organizussal, majd szubkután 50 vagy 150 mg/kg/nap dózisban beadjuk a kísérleti vegyületeket. Az állatoknak a kísérleti vegyületeket a fertőzést követő első és hatodik órában, majd ezután a következő három napon át napont adjuk be. Mindegyik csoportban az egerek túlélését 21 napon át feljegyezzük. Aktívnak tekintjük azokat a vegyületeket, amelyek 150 mg/kg/nap vagy ennél kisebb dózisban 14 napon át megvédik a fertőzött állatok legalább 70%-át. 5. táblázat (I) általános képletű vegyületek in vitro antifungá lis hatása 20 A példa sorszáma MIC-érték C. albicans (jtg/ml) A. fumigatus 1. < (alt 131)0,01 63 l.HCl-só 0,05 123 2. <0,4 1,6 3. £0,4 50 4. 0,03 0,8 5. 1,6 25 7. 1,6 25 11. 0,1 50 12. 0,03 63 13. 0,03 123 16. 1,6 25 17. £0,4 123 17.HC1-SÓ 0,03 0,4 18. £0,4 123 19. 0,03 L6 20. £0,4 1,6 21. 0,03 0,03 22. 0,03 33 22.HC1-SÓ 0,03 1,6 23. 0,03 0,1 23.HC1-SÓ 0,03 £03 24. 0,4 25 25. 0,4 33 26. 0,4 50 27. 0,03 63 28. 0,03 1,6 29. 0,03 123 30. 0,1 0,8 31. 0,03 33 32. 0,03 0,4 32.HC1-SÓ 0,03 0,4 33. 0,2 100 35. 0,03 100 39. £0,4 143 43. 0,3 50 45. 0,05 6,3 11 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
