200931. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású nukleozidok előállítására
HU 200931 B bofuranozil)-9H-purin 0,9 g (5 mmól) 6-izopropoxi-purint (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO) és 0,5 g (2,0 mmól) 2’,3’-didezoxi-3’-fluor-timidint 5 ml N’,N’-fimetilformamidban és 5 ml metil-szulfoxidban szuszpendálunk, hozzáadunk 35 ml 10 mmólos kálium-foszfát puffert (pH = 6,8, 0,04% kálium-azid), majd 5000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt cs 10 000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva és a kapott szuszpenziót 34 °C hőmérsékleten keverjük. 35 nap elteltével további 3000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 6000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt adunk hozzá 3 ml DEAE gyantán abszorbeálva és további 28 napon át keverjük. Ezután a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet egymás után kapcsolt oszlopokra adagoljuk. Az első oszlop 2,5 x 10 cm méretű, töltete AG1-X2 (OH-forma) gyanta, a második 2,5 x 20 cm méretű és a töltete Amberlite XAD-2 gyanta. A minták felvitele után az oszlopokat nagy mennyiségű vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket ezután flash-kromatografáljuk (szlikagél, 2,5 x 48 cm, diklór-metán/metanol = 9/1), majd a kapott terméket 25%-os acetonitrilben oldjuk és Ci8 HPLC oszlopra adagoljuk (Mikrosorb 22 mm (ID) x 500 mm) és 18 ml/perc sebességgel 25%-os acetonitrillel eluáljuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a terméket vízben oldjuk, majd liofilizáljuk. Ily módon 0,240 g cím szerinti vegyületet nyerünk, 0,15 hidrátja formájában. Elemanalízis a C13H17FN4O3 0,15 H2 összegképletű vegyületre: Számított: C% = 52,70, H% = 5,78, N% = 18,91, F% = 6,41, Mért: C% = 52,46, H% = 5,78, N% = 18,48, F% = 6,49. A termék szerkezetét tömegspektrummal és NMR adatokkal igazoltuk. 12. példa 5-piperidinil-9-(béta-D-2,3-didezoxi-3-fluor-ri bofuranozil)-9H-purin 1 g (5,1 mmól) 6-piperidinil-purint (Sigma Chemical Company, St. Louis MO) és 0,5 g (2 mmól) 2’,3’-didezoxi-3’-fluor-timidint 5 ml N’,N’-dimctilformamidban és 5 ml metil-szulfoxidban szuszpendálunk, hozzáadunk 35 ml 10 mmólos kálium-foszfát-puffert (pH = 6,8, 0,04% kálium-azid), 5000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 10 000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt 5 ml DEAE gyantán abszorbeálva és a kapott szuszpenziót 34 °C hőmérsékleten keverjük. 35 nap elteltével további I.U. tisztított nukleozid-foszforilázt adagolunk hozzá 3 ml DEAE gyantán abszorbeálva. További 58 nap elteltével a reakciókeveréket szűrjük és a születet egymás után kapcsolt oszlopokra adagoljuk. Az első oszlop 2,5 x 10 cm méretű és AG1-X2 (DH- forma) töltetű, a második 2,5 x 10 cm méretű cs Amberilite XAD-2 gyanta töltetű. A minták felvitele után az oszlopokat nagy mennyiségű vízzel átmossuk és terméket metanollal eluáljuk. A terméket ezután flash-kromatografáljuk (szilikagél, 5 x 10 cm, diklór-metán/metanol = 9/1), az oldószert vákuumban eltávohjuk és a terméket vízben oldjuk, majd Iioflilizáljuk. Ily módon 0,197 g cím szerinti 11 vegyületet nyerünk, 0,35 etanol tartalommal. Elemanalízis a C15H20FN5O2 0,15 EtOH öszszegképletű vegyületre: Számított: C% = 55,88, H% = 6,60, N% = 20,75, F% = 5,63, Mért: C% = 55,72, H% = 6,48, N% = 20,80, F% = 5,78. A termék szerkezetét NMR és tömegspektrum adatokkal bizonyítottuk. Vírus-ellenes aktivitás A 9. példa szerinti vegyületek anti-HIV aktivitását MT4 sejteken vizsgáltuk és IC50 értékekre a következő adatot kaptuk: 9 junól. 8. példa 6-Ciklopropil-amino-purin-9-béta-D-2’,3’-did ezoxi-3’-fluoro-ribofuranozid o.p.: 144-146 °C ’h NMR (200 MHz, DMSO-de): 8 8,32 és 8,22 (2 s, 2H, H2 és Hg), 7,97 (d, 1H, NH, J= 4,1 Hz), 6,39 (dd, 1H, Hi J = 5,7 Hz, J=9,2 Hz), 5,45 (m, 1H, OHs), 5,43 (dd, 1H, H3 J=53,7 Hz,J = 4,3 Hz), 4,23 (dt, 1H, H4 J = 26,8 Hz, J = 4,6 Hz), 3,60 (m, 2H, H5, és HS), 3,09 (m, 1H, NCH), 2,91 és 2,64 (2m, 2H teljes, H2, és H2), és 0,72 és 0,60 (2m, 4H teljes, ciklopropil-csoport). 9. példa 2-Amino-6-metoxi-purin-9-béta-D-2’,3’-didez oxi-3’-fluoro-ribofuranozid o.p.: 145 °C *H NMR (200 MHz, DMSO-dé): 8 8,08 (s, 1H, Hg), 6,46 (b, 2H, NH2), 6,24 (dd, 1H, Hi J = 5,7 Hz, J = 9,2 Hz), 5,39 (dd, 1H, H3 J = 54 Hz, J=4,2 Hz), 5,18 (t, 1H, OHs J = 5,6 Hz), 4,16 (dt, 1H, H4 J = 4,9 Hz, J = 27 Hz), 3,94 (s, 3H, OCH3), 3,56 (t, 21H, Hs, és H5 J = 5,2 Hz), 2,80 (m, 2H, H2, és H2) 10. példa 6-Ciklopentoxi-9-(2’,3’-didezoxi-3,-fluoro-béta -D-eritropentofuranozil)-9H-purin o.p.: 111-113 °C *H NMR (200 MHz, DMSO-dó): 8 8,56 és 8,51 (2s, 2H, H2 és Hg), 6,46 (dd, 1H, Hí J = 5,9 Hz, J = 9,0 Hz), 5,68 (m, 1H, OCH), 5,45 (dd, 1H, H3 J = 53,6 Hz, J = 4,4 Hz), 5,22 9t, 1H, 5’ OH, J = 5,7 Hz), 4 (dt, 1H, H4 J = 26,4 Hz, J = 4,8 Hz), 3,60 (t, 2H, HS, és Hs J = 5,3 Hz), 2 (m 2H, H2, és H2), 2,00 és 1,73 (2m, 2H és 6H, 4 CH2). 11. példa 6-Izopropoxi-9-(2’,3’-didezoxi-3,-fluoro-béta- D-eritropentofuranozil)-9H-purin o.p.: 147-148 °C ]H NMR (300 MHz, DMSO-dó): 8 8,58 és 8,53 (2s, 2H, H2 és Hg), 6,48 (dd, 1H, Hí J= 5,9 Hz, J = 8,9 Hz), 5,60 (m, 1H, OCH, J = 6,2 Hz), 5,46 (dd, 1H, H3 J = 53,6 Hz, J=4,5 Hz), 5,25 (b, 1H, OH5,), 4,26 (dt, 1H, H4 J = 26,6 Hz, J = 4,8 Hz), 3,61 (b, 2H, Hs, és Hs), 3,04 és 2,71 (1 m, 2H, H2, és H2), 1,40 (d, 6H, 2-CH3, J = 6,2 Hz). 12. példa 6-Piperidinil-9-(2’,3’-didezoxi-3’-fluoro-béta-12 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
