200799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nisztatin előállítására
HU 200799 B Saccharomyces cerevlsiae MCYC 87 tesztorganizmussal. A példákban bemutatjuk a Streptomyces noursel ssp. albidus törzsek fermentációjának, a gyártási eljárásnak a részleteit, anélkül, hogy ezzel a találmányunkat korlátozni akarnánk. 1. példa A Streptomyces noursel ssp. albidus MNG-00255 szám alatt letétbe helyezett törzs mélyhűtve tárolt spóraszuszpenziójából 2 mlrel beoltjuk a következő összetételű inokulum 3 táptalajt: kukoricaliszt 30 g kukoricalekvár 5 g ammóniumnitrát 4 g kalciumkarbonát 10 g nátriumklorld 2 g kalciumdihidrogénfoszfát 1 g csapvfz 1000 ml pH: 6,2—6,4 (150 ml-es Erlenmeyer lombikban 25—25 ml steril táptalaj) Az oltóanyag készítését 2 napig folytatjuk 280C-on, rázóasztalon (400 fordulat/perc, 2.54 cm lökethossz). A kifejlődött oltóanyag tenyészet 2,5 — 2,5 ml-ével beoltjuk a következő összetételű fermentációs táptalajokat. glükóz 25 g kukoricalekvár 5 g ammóniumnitrát 8 g szójaliszt 18 g kalciumkarbonát 7 g csapvíz 1000ml pH: 6,1—6,3 (150 ml-es Erlenmeyer lombikban 25—25 ml steril táptalaj) A steril táptalajhoz oltás előtt steril körülmények között lombikonként 0,25—0,25 ml 96%-os etanolt adagolunk. A fermentációt 28°C-os végezzük, rázóasztalon (400 fordulat/perc, 2.54 lökethossz), 6 napig. A fermentáció befejezésekor — a 6. oldalon leírt kémiai és biológiai módszerek alapján meghatározva — a fermentlé átlagos nisztatin tartalma 86200 E/ml. 2. példa Az első példa szerint előállított oltóanyag-tenyészet 2,5—2,5 ml-óvel beoltjuk az 1. példában megadott összetételű fermentációs táptalajt, azonban a 25—25 ml steril táptalajokhoz (150 ml-es Erlenmeyer lombikokban) oltás előtt 0,25—0,25 ml Izopropanolt adagolunk. Az 1. példában leírt körülmények között végezve a tenyésztést, a fermentáció befejezésekor — a 6. oldalon megadott kémiai és biológiai módszerek alapján végezve a meghatározást — a fermentlé átlagos nlsztatin tartalma 82500 E/ml. 3 3. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de alkoholként 1 tf%-nyi koncentrációban n-propanolt adagolunk a fermentációs táptalajba: ebben az esetben a fermentlé átlagos nlsztatin tartalma 79800 E/ml. 4. példa A Streptomyces noursei ssp. albidus MNG-00255 szám alatt letétbe helyezett törzsével az 1. példa szerinti laboratóriumi oltóanyagot állítjuk elő (de 500 ml-es Erlenmeyer lombikban 100 ml-t), s a kifejlődött tenyészet 1 ml-ét beoltjuk az azonos összetételű, 8 I táptalajba (14 l-es üvegfermentorban). Az oltóanyagkószítós paraméterei: hőmérséklet 28°C, levegőztetés 8 l/perc, keverő fordulatszáma 600/perc, időtartam 26 óra. Habzásgátlóként — szükség szerinti — pálmaolajat használunk. A kifejlődött oltóanyag 800 ml-ét beoltjuk 8 I fermentációs táptalajba (14 l-es üvegfermentorban). A táptalaj összetétele azonos az 1. példában megadottal, azonban a beoltás előtt 80 ml 96%-os etanolt adagolunk. A fermentációt 6 napig, 28°C-on, 8 l/perc levegőztetés és 600 fordulat/perc kevertetés mellett folytatjuk le. Habzásgátlóként — szükség szerint — pálmaolajat használunk. A fermentáció végén — a 6. oldalon leírt kémiai és biológiai módszerek alapján meghatározva — a fermentlé átlagos nisztatin tartalma 158600 E/ml. 5. példa A Streptomyces noursei ssp. albidus MNG- 00255 szám alatt letétbe helyezett törzsével a 4. példa szerint állítjuk elő üvegfermentorban az oltóanyagot, majd a tenyészet 800 ml-ével beoltjuk a következő összetételű, 8 I táptalajt (14 I üvegfermentorban): 4 kukoricaliszt 560 g szójaliszt 64 g ammóniumnitrát 32 g kalciumkarbonát 40 g nátriumklorid 16 g trinátriumfoszfát 3,2 g pálmaolaj 32 g víz 8000 ml pH: 6,1—6,3 Az összeállított táptalajban, keverés közben 80 mg alfaamilázzal, 80°C-on, 10 percig, elfolyósítjuk a keményítőt, majd 60 percig 122— 123°C-on sterilezzük. Oltás előtt a steril táptalajhoz 80 ml 96%-os etanolt adagolunk. A fermentációt 5 napig: 30°C-on, 8 l/perc levegőztetés és 600 fordulat/perc kevertetés mellett folytatjuk le. Habzásgátlóként — szükség szerint — pálmaolajat hásználunk. A fermentáció végén — a 6. oldalon leírt kémiai és biológiai módszerek alapján meghatározva — a fermentáció nisztatin tartalma 102600 E/ml. 6. példa Mindenben az 5. példa szerint járunk el, de a fermentációs táptalaj összetétel a következő: búzakeményítő 560 g szójaliszt 64 g ammóniumnitrát 32 g kalciumkarbonát 40 g 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
