200799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nisztatin előállítására
5 HU 200799 B 6 nátriumklorid 16 g trinátriumfoszfát 3,2 g pálmaolaj 32 g víz 8000 ml pH: 6,1—6,3 Ebben az esetben a fermentlé nisztatin tartalma 112400 E/ml. 7. példa Mindenben a 6. példa szerint járunk el, de a fermentációs táptalajba oltás előtt alkoholként 1 tf%—nyi koncentrációban izopropanolt adagolunk. Ebben az esetben a fermentlé nisztatin tartalma 98800 E/ml, 8. példa Mindenben a 6. példa szerint járunk el, de a fermentációs táptalajba oltás előtt alkoholként 1 tf%—nyi koncentrációban n-propanolt adagolunk. Ebben az esetben a fermentlé nisztatin tartalma 102200 E/ml. 9. példa Mindenben a 6. példa szerint járunk el, de az alkoholként adagolt 96%-os etanol mennyisége oltás előtt 40 ml (0,5 tf%), majd a fermentáció folyamán kétszer (24 és 48 órás korban) 40— 40 ml-t adagolunk a tenyészethez. A fermentlé nisztatin tartalma ebben az esetben 109200 E/ml. 10. példa A Streptomyces noursei ssp. albidus MNG-00255 szám alatt letétbe helyezett törzsének az 1. példa szerint állítjuk elő a laboratóriumi oltóanyagot (de 500 ml Erlenmeyer lombikban 100 ml-t) , s a kifejlődött tenyészet 8 ml-ét beoltjuk az azonos összetételű 30 I táptalajba (50 l-es fermentorban) . Az oltóanyagkészítés paraméterei: hőmérséklet 28°C, levegőztetés 30 l/perc, keverő fordulatszám 400/perc, időtartam 28 óra. Habzásgátlóként — szükség szerint — pálmaolajat használunk. A kifejlődött oltóanyag 20 l-ét beoltjuk a 1801 fermentációs táptalajba (300 l-es fermentorban), melynek összetétele azonos a 6. példában megadottal. Az összeállított táptalajban ekkor is elfolyósítjuk a keményítőt, 2,0 g alfa-amilázzal, keverés közben, 80°C-on, 10 percig; majd 60 percig 122-123°C-on sterilizáljuk a táptalajt. Oltás előtt a steril táptalajhoz 2 I 96%-os etanolt adagolunk. A fermentációt 5 napig, 30°C-on, 200 l/perc levegőztetés, és 350 fordulat/perc kevertetés mellett folytatjuk le. Habzásgátlóként — szükség szerint — pálmaolajat használunk. A fermentáció végén — a 6. oldalon leírt kémiai és biológiai módszerek alapján meghatározva — a fermentlé nisztatin tartalma 118100 E/ml. 11. példa Mindenben a 10. példa szerint járunk el, de alkoholként n-propanolt adagolunk a fermentációs táptalajba, 1 tf%-nyi mennyiségben: 2 l-t. A fermentlé nisztatin tartalma a fermentáció befejezésekor 130500 E/ml. 12. példa Mindenben a 10. példa szerint járunk el, de habzásgátlóként a fermentáció 72. órája után pálmaolaj helyett polipropilénglikolt adagolunk, 0. 1 tf%-nyl mennyiségben, 200 ml-t. A fermentlé nisztatin tartalma a fermentáció befejezésekor 114600 E/ml. 13. példa A Streptomyces noursei ssp. albidus MNG- 00255 szám alatt letétbe helyezett törzsével az 1. példa szerint előállítjuk a laboratóriumi oltóanyagot, majd beoltjuk (100 ml) a következő összetételű steril táptalajt (5 m3 térfogatú előfermentorban): kukoricaliszt 90 kg kukoricalekvár 30 kg (50%-os nedves) ammóniumnitrát 12 kg kálciumdihidrogén-foszfát 3 kg kálciumkarbonát 30 kg pálmaolaj 15 kg víz 30001 pH: 6,2 — 6,4 Az üzemi oltóanyag előállításához 180 m3/óra levegőztetést alkalmazunk, a keverő fordulatszáma 180/perc, a hőmérséklet 28°C. A 28 óra alatt kifejlődött oltóanyagot beoltjuk egy 56 m3 térfogatú csőfermentorba, mely a kővetkező összetételű steril táptalajt tartalmazza: búzakeményítő 2100 kg szójaliszt 240 kg ammóniumnitrát 120 kg kalciumkarbonát 150 kg nátriumklorid 60 kg trinátrium-foszfát 12 kg pálmaolaj 150 kg víz 30.000 I pH: 6,2—6,4 Az összeállított táptalajban 300 g alfa-amilázzal 80°C-on, 10 percig elfolyósítjuk a keményítőt, majd 122—123°C-on sterilezőnk 60 percig. A steril táptalajba — oltás előtt — 300 I 96%-os etanolt adagolunk steril körülmények között. A fermentációt 6 napig folytatjuk 28°C-on, 1800 m3/óra levegőztetés mellett. Habzásgátlóként — szükség szerint — pálmaolajat alkalmazunk. A fermentáció befejezésekor a fermentló nisztatin tartalma 88600 E/ml. A fermentáció befejezésekor a 30.000 liter fermentléhez 96 kg foszforsavat adagolunk keverés közben, majd a pH-t ammónium-hldroxiddal 7,0—7,2-re állítjuk, 3 órás keverés után a kezelt fermentlevet keretes szűrőpréseken szűrjük, vízzel mossuk. A csapadékot ezután összegyűjtjük és 2100 liter vízzel felszuszpendáljuk, majd a szuszpenziót porlasztva szárítón szárítjuk (180°C bemenő, 105°C elmenő hőmérséklet mellett). A szárított csapadék tömege 878 kg, 2480 E/mg a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
