200794. lajstromszámú szabadalom • Eljárás malária antigének kifejezésére
3 HU 200794 B 4 Science> 217, 254-257 /1982/); McBride és munkatársai: Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 78, 32-34 /1984/; Hall, R. és munkatársai /1984 a/, fentebb idézett munka). Azok, akik a szakterületen jártasak, méltányolni tudják, hogy ezek az antigének homológok, és hogy az egyes antigén determinánsokban kimutatott különbségek nem lehetnek fontosak egy immunválasz szélesebb érzékelésében egy állatban. Kimutatták, hogy a P.195-el immunizált Saimiri majmok védve voltak a fertőzés kihívása ellen (Perrin, L.H. és munkatársai: J. Exp. Med 160, 441-451 /1984/i Hall, R. és munkatársai: Nature, 311, 379-382 /1984 b/). Az .epitop' kifejezés, ahogyan itt használjuk, egy immunogén molekula egy immunogén determinánsát jelenti; az immunogén determináns egy fogékony állatban védő immunválasz kiváltására képes molekuláris konfigurációt tartalmaz, amikor megfelelő formában van jelen. Figyelembe kell venni, hogy a P.195 alléi változatok tárgya lehet, ahol a P. falciparum különböző törzsei különböző, de lényegében bármiféle más törzs P.195 fehérjéhez hasonló fehérjéket fejeznek ki. Az itt leirt P. falciparum törzsből származó P.195 gén összehasonlítása egy Thaithong és munkatársai (Thaithong, S., Beale, G.H., Fenton, B., McBride, J. Rosario, V., Walker, A. és Walliker, D.: Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 78, 242-245 /1984/) által izolált törzsből származó megfelelő génnel Southern foltképzéssel strukturális polimorfizmust mutatott, amely nukleinsav hibridizálással mutatható ki (Schwartz, R.t.). A fentebb körvonalazott okokból úgy vélhető, hogy a P. falciparum P.195 vagy ennek egy antigén-fragmense értékes a vérstádiumban levő malária-vakcinában való felhasználáshoz. Abból a célból, hogy' ezt a fehérjét vagy egy antigén-fragmensét kinyerjük (pl. olyan fragmenst, amely in vivo keletkezik és amely jelen van a merozoita-felületen) nagy mennyiségben és viszonylag tiszta formában, kivánatos lenne azonosítani a DNS szekvenciáját az ennek a fehérjének a kifejeződését kódoló génben P. falciparumban. A szekvencia azonosítása után kivánatos lenne előállítani a fehérjemolekula immunológiáikig hatásos részeit, vagy ennek a szekvenciának a klónozásával egy megfelelő vektorban és kifejezésével egy megfelelő gazdaszervezetben, vagy az azonosított szekvenciának megfelelő aminosav szekvencia kémiai szintézisével. Mi rájöttünk, hogy lehetséges klónozni azt a DNS szekvenciát, amely lényegében a P. falciparumból származó, fentebb leírt antigént (P.195) kódolja, és hogy funkcionális antigént vagy fragmenseit lehet nyerni az említett klónozott DNS-t beépítve egy megfelelő vektorba, amely megfelelő gazdaszervezetben képes kifejezni ennek legalább egy epitopját tartalmazó antigént vagy peptidet. A jelen találmány egyik vonása szerint lényegében a P. falciparumból származó P.195 fehérjét vagy ennek legalább egy epitopját tartalmazó peptidet kódoló klónozott DNS szekvenciát tudunk nyújtani. A .klónozott' kifejezést itt úgy használjuk, hogy bármely olyan DNS szekvenciát jelöl, amely lényegében természetes gazdaszervezetén kívül szintetizálódott. A .peptid. kifejezést itt úgy használjuk, hogy bármilyen olyan molekuláris szerkezetre vonatkozik, amely lényegében több, mint két aminosavat tartalmazó aminosav-sorozatból van összeállítva. így világossá válik, hogy a P.195 e szerint a meghatározás szerint peptid. Azt is méltányolni kell, hogy a jelen találmány szerinti DNS szekvenciák megfelelhetnek természetben előforduló szekvenciáknak, vagy vonatkozhatnak olyan szekvenciákra is, amelyeken egyszeres vagy többszörös bázis-helyettesitések, hiányok (deléciók), beiktatások (inzertek) és inverziók történtek, de mindig azzal a feltétellel, hogy egy ilyen szekvenciát tartalmazó DNS . molekula képes kifejeződni olyan peptidként,' amely a P. falciparum P.195 fehérjének legalább egy epitopját hordozza. A találmányban ez után több részletet is le fogunk írni a kísérő rajzokra hivatkozva, amelyek közül- az 1. ábra a P.195-öt kódoló gént tartalmazó P. falciparum DNS egy szakaszának bázis-szekvenciáját mutatja be, és azt az aminosav-szekvenciát, amelyet ez kódol;- a 2. ábra a P.195 gén cDNS restrikciós térképét mutatja be;- a 3. ábra a P.195 genom-szekvencia restrikciós térképét mutatja be;- a 4. ábra a találmány szerinti példa folyamán alkalmazott plazmidok szerkezetét mutatja be. Az 1A-1I ábrák sorban bemutatják a P.195 gén nukleotid szekvenciáját, az aminosav-szekvenciát, amelyet ez kódol, és a szekvencia szakaszait a kódoló szekvencia mindkét végénél. A betűk mindegyik kettős sorának alsó sora jelenti a nukleotidokat a konvenció szerint leírva, míg a felső vonal mutatja az aminosav-szekvenciát amelyet a nyitott olvasókeret kódol, az aminosavakat jelölő betűket a hagyományos módon alkalmazva. A szekvenciákat az itt leirt módon határoztuk meg, és figyelembe kell venni, hogy bár ezt olyan pontosan határoztuk meg, amennyiben csak lehet a kísérleti hiba határain belül, a P.195 genetikai szekvenciájában lehetnek bizonyos variációk. A 2. ábra mutatja be a gént, beleértve a kódoló szekvencia mindkét végén túl kiter-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
