200793. lajstromszámú szabadalom • Génsebészeti eljárás új, humán interleukin-2-fehérje előállítására
23 HU 200793 B 24 A mépési eredmények alapján felvesszük az endotoxin koncentráció görbéjét: log C = -3,07 x log Tg + 2,389 r = -0,997 A toxinométeri ET-201 készülék 660 nm hullámhosszon a LAL/endotoxin oldat gélese- 5 dés közben fellépő zavarosság változást méri és automatikusan a minta gélesedési idejét jelzi ki. A készülék egyidejűleg 64 mintánál és egymástól függetlenül 12 másodperces időintervallumokban a kezdeti elnyeléshez vi- 10 szonyított pillanatnyi érték R(t) arányát jelzi ki. A gélesedés pontos kimutatásához a mintákat 37 ± 0,5 °C hőmérsékleten • inkubáljuk és igy kizárjuk a minta rázódásából származó hibákat. A készülék a T(G) gélesedési időt 15 adja meg, amely az R(t) 55É-os növekedéséhez szükséges reakcióidőnek felel meg és felhasználható az endotoxin koncentráció kiszámításához. Ezután az rIL-2 készítményeket vízben oldjuk, majd a fent ismertetett eljárás végrehajtása után meghatározzuk a gélesedési időt. A mérési eredményekből a standard endotoxinnal felvett görbe alapján meghatározzuk az oldatok endotoxin koncentrációját és ez alapján az rIL-2 fehérje 1 mg-jóra vonatkoztatott endotoxin tartalmat. A mérési eredményeket a 7. táblázat tartalmazza. 7. TÁBLÁZAT rIL-2 készítmény Endotoxin Fehérje koncentráció Endotoxin/fehérje koncentráció (mg/ml) (ng/ml) (ng/ral) Nyers extraktum 01 tétel 02 tétel Tisztított készítmény 51 tétel 52 tétel 3.1 x 104 4.1 x 104 1,8 x 10'2 1,4 x 10-2 15,4 2,0 x 103 14,0 2,9 x 103 1,08 1,7 x 10-2 0,98 1,4 x 10-2 11-2. kísérlet: Az rIL-2 készítmények pirogenecitásának meghatározása (1) Felhasznált anyagok: Az rlL-2 készítményeket (nyers extráktűm 01 és 02 tétel, valamint tisztított készítmény 51 és 52 tétel) a I. kísérlet szerint állítjuk elő. A kísérleti állatként alkalmazott nyulakat az Ichikawaya tenyészetből (Tokió, Japán) szerezzük be. ^ (2) Kísérlet} módszerek és eredmények: A pirogén tesztet a • .Minimum Requirements of Biological Products, Association of Biologicas Manufacturers of Japan, 1986* 324-326. oldalán megadott módon végezzük. A1 mérési eredményeket a 8. táblázatban adjuk meg. 8. TÁBLÁZAT rIL-2 készítmény Dózis Hónérsékletemelkedés Pirogenecitás (rIL-2 egység/kg) (°C) Nyulak sorszáma: 1 2 3 Össz. Nyers extraktum 01 tétel 20 0,8 1,6 1,8 4,2 + 02 tétel Tisztított 20 0,7 1,1 1,2 3,0 + készítmény 51 tétel 200 0,2 0,2 0,3 0,7 _ 52 tétel 200 0,2 0,2 0,3 0,7-14
