200793. lajstromszámú szabadalom • Génsebészeti eljárás új, humán interleukin-2-fehérje előállítására
25 HU 200793 B 26 Az alkalmazott pufferek pirogén mentesek. (3) Kiértékelés: A mérési eredményekből látható, hogy a tisztított készítmények pirogén mentesek, míg 5 a nyers extraktumok' a humán gyógyászatban alkalmazható klinikai dózisban az alkalmazott vizsgálati módszer pirogenecitást mutatnak. 10 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. ) Eljárás lényegében tiszta nem glikozilezett humán interleukin-2 fehérje előállítására, amelynek fajlagos aktivitása nem keve- 15 sebb, mint 104 egység/mg, azzal jellemezve, hogy a) egy humán interleukin-2-t kódoló bázisszekvenciával rendelkező DNS-t hordozó E. coli transzformáns törzset megfelelő tenyésztő közegben tenyésztünk és b) az igy 20 nyert humán interleukin 2-t hidrofób oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. 2. ) az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hidrofób oszlopjcromatográfiaként fordított fázisú oszlopot 'használó 25 nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát alkalmazunk. 3. ) A 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a kromatográfiát 1,5-8 közötti pH értékű eluálószert alkalmazva hajt- 30 juk végre. 4. ) A 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a kromatográfiát 0,1- -100 ml/perc áramlási sebesség mellett hajtjuk végre. 35 5. ) Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a humán interleukin-2-t növekvő transzformáns sejtekben állítjuk elő és halmozzuk fel és a humán interleukin 2-t a sejtekből kivonjuk, igy {utmán interleukin- 40 -2-tartalmú folyadékot nyerünk. 6. ) Az 5. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a humán interleukin 2-t egy fehérje-denaturáló szer oldatával vonjuk ki. 45 7. ) A 6. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a humán interleukin 2-t. egy guanidin só 2 mól/liter és 8 mól/liter közti koncentrációjú oldatával vonjuk ki. 8. ) Eljárás gyógyászati kompozíció elöál- 50 litására, azzal jellemezve, hogy lényegében tiszta, nem glikozilezett humán interleukin-2 fehérjét, amelynek fajlagos aktivitása nem kevesebb, mint 104 egység/mg, farmakológiailag elfogadható hordozóval, vivőanyaggal 55 vagy hígitóval keverünk össze. Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest - A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető R 4955 - KJK 90.3261.66-13-2 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Szabó Viktor vezérigazgató 15
