200768. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aril-szubsztituált naftiridin-származékok valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 200768 B 2 mg/kg mepiramint adtunk be összesen 1 ml/kg térfogatban. 15 perc múlva az állatok porlasztott ovalbumint kaptak. A kísérleti anyagokat az ovalbumin bejuttatása előtt 2 órával adtuk be. Az anafilaxiás hörgőgörcs elfojtását mint a légcsövön belül mért nyomás csúcsértékének százalékos gátlását fejezzük ki, az oldószerrel kezelt kontrollcsoportéhoz hasonlítva. Négy, találmány szerinti vegyületet vizsgálva a fenti eljárással, azt találtuk, hogy ezek az anafilaxiás hörgőgörcsöt gátolják,, amint azt az 1. táblázat szemlélteti. 5 I. táblázat A vizsgált vegyület a (XVIII) általános képletű Vegyület Y -B-W EDso (p.o.) az anafiszáma hörgőgörcs laxiás tesztben 1. m-Cl-(CH2)4-2 mg/kg 2. (Hemi- H hidrát) ~(CH2)4-2 mg/kg 3. m-Cl-(CH2)4-0- 5 mg/kg 4. H-(CH2)4--0- 1 mg/kg Azt találtuk, hogy ezek a veyületek gátolják az allergénnel kiváltott hisztamin felszabadulást is tengerimalacból és humán, szenzibilizált szövetből. A vegyületek hatásos nem-adrenerg, nem-antikolinerg, antianafílaxiás szerek. Orálisan beadva, a vegyületek hatásosak körülbelül 0,5-25 mg/kg, előnyösen 0,5-10 mg/kg testtömeg dózisokban; parenterálisan, például intravénásán beadva, a vegyületek hatásosak körülbelül 0,1-5 mg/kg, előnyösen 0,1-2^ mg/kg testtömeg dózisokban; és belélegeztetéssel beadva (aeroszól vagy porlasztó) a vegyületek hatásosak körülbelül 0,1-5 mg/löket dózisokban, minden 4 órában 1-4 löket adható be. A találmány szerint előállított vegyületek alkalmazhatók gyulladások kezelésére is, így ízületi gyulladás, nyálkatömlőgyulladás, íngyulladás, köszvény és más gyulladásos fizikai állapotok kezelésére használhatók. A találmány szerint előállított vegyületek gyulladás elleni hatását a „Reversed Passive Arthus Response Technique igazolja, amit az alábbiakban ismertetünk. Reversed Passive Arthus Response (RPAR) Állatok, anyagok és eljárások 180-200 g tömegű, hím, beltenyészetből származó, albino Lewis patkányokat (Charles River Breeding Laboratories) használunk ezekben a kísérletekben. A patkányokat hármasával helyezzük egy ketrecbe, élelmet és vizet tetszés szerint vehetnek magukhoz. Az állatokat azonosítás céljából minden egyes ketrecben 1-3 számozással és színjelzéssel látjuk él. A gyógyszerek és reagensek elkészítése Valamennyi reagenst és gyógyszert közvetlenül a kísérlet előtt készítjük el. A kristályosított és liofílizált marha-szérumalbumint (BSA, Sigma Chemical Company) rázás nélkül hideg, steril, pirogén anyagoktól mentes sóoldatban szolubilizáljuk (10 mg/ml). A liofílizált anti-marha szérumalbumint (IgG frakció, Cappel Laboratories) steril desztillált vízben szuszpendáljuk és közvetlenül a felhasználás előtt hideg, pirogén anyagoktól mentes sóoldatokkal (PFS) hígítjuk. Az anti-marha szérumalbumin végső koncentrációja a pirogén anyagoktól mentes sóoldatban 0,5 mg/ml. Mind a marha-szérumalbumin, mind az anti-marha szérumalbumin oldatait jegeljük a használat során. A gyógyszereket közvetlenül a felhasználás előtt vizes mctil-cellulóz oldatban homogenizátorral szuszpendáljuk vagy szolubilizáljuk. A gyógyszerek elkészítése és gyulladás előidézése Az állatok csoportjainak (6/csoport) a gyógyszer metil-cellulózos oldatát 3 napon át, naponta egyszer gyomorszondával beadjuk. Az utolsó dózist 1 órával a marha-szérumalbuminnal végzett szenzibilizálás előtt adjuk be. A kontrollok csak metil-cellulózt kapnak, és általában valamennyi vizsgálatnál használunk egy standard gyógyszert, ellenőrzés céljából. A gyógyszereket úgy készítjük el és úgy hígítjuk, hogy egy 200 g tömegű állatnál olyan dózist adjanak, amely a mg/kg dózisnak felel meg mindegyik kísérletnél. így mindegyik patkány körülbelül 2,0 ml térfogatú orális dózist kap. Az utolsó dózis beadása után 1 órával az állatokat éterrel kissé narkotizáljuk és 0,2 ml pirogén anyagoktól mentes sóoldatban 1,0 mg marha-szérumalbumint az állatok péniszvénájába injektálva azokat szenzibilizáljuk. Egy óra múlva az állatok jobb hátsó lábába 0,2 ml pirogén anyagoktól mentes sóoldatban 0,1 mg anti-marha szérumalbumint szubplantáris injekcióban (talpba) beadunk. Közvetlenül a szubplantáris injekció után az állat jobb lábát (a külső bokáig) pletizmográf higanytartályába merítjük. A kiszorított higany térfogatát átszámoljuk súlyra és feljegyezzük. Ezt az értéket tekintjük az állat kontrollértékének. Ezután méijük a lábtérfogatokat pletizmográffal a gyulladás kifejlődése alatt, 2 és 4 órával a kiváltó dózis beadása után. Eredmények Az eredményeket a lábtérfogat változásával (A lábtérfogat) fejezzük ki, amit minden egyes állatnál a kontroli-értéktől a kiváltó dózis után 2 és 4 óráig mérünk. Valamennyi, gyógyszerrel kezelt csoportot összehasonlítunk a csak metil-cellulózt kapott kontroll csoporttal szignifikáns differenciákra, varianciaanalízissel. A különbséget a kontrollcsoport és a gyógyszerrel kezelt csoportok között a kontrollcsoport százalékos változásával fejezzük ki. Az eredményeket a II. táblázat szemlélteti. 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
