200747. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, nitro-alifás vegyületek előállítására
1 HU 200747 B 2 A reakciót előnyösen úgy végezzük, hogy első lépésben a (IV) általános képletű vegyület karboxilcsoportját önmagában ismert módon aktiváljuk, például aktivált észterként, savhalogenidként, savanhidridként, vegyes anhidridként, stb., majd az így kapott vegyületet reagáltatjuk a HNR8R9 általános képletű aminnal vagy sójával. A reakciót általában oldószerben, például tetrahidrofuránban, diklór-metánban, dioxánban, vízben, vagy azok elegyében játszatjuk le. A reakciót előnyösen enyhébb körülmények között, például hűtés közben vagy szobahőmérsékleten végezzük. Egyebekben a (II) és (III) általános képletű vegyületeket a hasonló típusú vegyületek előállítására általánosan ismert analóg eljárásokkal állítjuk elő. Az (I) általános képletű nitroalifás vegyületek egy vagy több sztereoizomert tartalmaznak, és az összes ilyen izomer beletartozik a találmány szerint előállított, illetve alkalmazott vegyületek körébe. Az új (I) általános képletű nitroalifás vegyületek és gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóik a sima izomszövetre relaxációs hatást, például cardiovaszkuláris tágító hatást, és hipotenzív hatást mutatnak, ezenkívül gátolják a vérlemezke-aggregációt. Ezért az új (I) általános képletű nitroalifás vegyületek értágítóként alkalmazhatók koronaér elégtelenség, angina pectoris és miokardiális infarktus kezelésére, ezen kívül antihipertenzív szerként magas vérnyomás kezelésére. Használhatók ezen kívül trombózis ellenes szerként agyszélhüdés, trombózis és tüdőembólia kezelésére. Az (I) általános képletű új nitroalifás vegyületek gyógyászati hatásának szemléltetésére az alábbi farmakológiái kísérleteket végeztük: i) Vérlemezke aggregációt gátló hatás A találmány szerint előállított nitroalifás vegyületek nyúl vérlemezke aggregációt gátló hatását az alábbi módszerrel vizsgáltuk: 2,5-3,0 kg testsúlyú hím japán fehér (Japanese white) nyulak központi fül-artériájából vért vettünk. A vér koagulációját 9 rész vérhez 1 térfogatrész 3,8 %-os nátrium-citrát oldat hozzáadásával gátoltuk meg. Ezután vérlemezkében gazdag plazmát (PRP) állítottunk elő a vérnek 10 percen át és 10 °C hőmérsékleten 1300/perc fordulatszámmal végzett centrifúgálásával. A PRP-t ezután vérlemezkében szegény plazmával hígítottuk, melyet a vérnek 3000/perc fordulatszámon további 10 percen át történő centrifúgálásával állítottunk elő. Az aggregációs vizsgálatok során a PRP vérlemezke tartalma körülbelül 4,0 x 105 vérlemezke/mm3 volt. Az aggregometriás vizsgálatokat vérlemezke aggregáló szerekkel, SIENCO aggregométerben (DP-247 E) 37 °C hőmérsékleten végeztük és 0,3 ml össztérfogatban PRP-t és reagenst elegyítettünk hengeres üveg küvettában, mágneses keverővei, történő folyamatos keverés közben. A vérlemezke aggregációt turbidimetriás módszerrel mértük, melynek során a PRP aggregáció során történő fényáteresztésében bekövetkezett változást regisztráltuk. A gátló hatást IC50 értékben fejeztük ki, mely az a koncentráció, mely a vérlemezke aggregációt 50 %-ban gátolta. A kollagént olyan mennyiségben (2-20 pg/ml PRP) alkalmaztuk, mely a maximálisan elérhető hatás 80-90 %-át indukálta. Az arachidonsavat 5 pmól végkoncentrációban alkalmaztuk. Hasonlóképpen az adenozin-difoszfát (ADP) végkoncentrációját, általában 1-5 |imól mennyiséget úgy választottuk meg, hogy az a maximális aggregációnak kb. 75 %-át indukálja. A trombint 0,3 E/ml végkoncentrációban használtuk. Az eredményeket az alábbi I. és II. táblázatban tüntetjük fel. I. Táblázat Induktor IC50 érték (pg/ml) Vizsgált vegyület (1. példa) Kollagén 0,07 Trombin 0,15 ADP 0,15 Arachidonsav 0,75 11. Táblázat Vizsgált vegyület (példa száma) IC50 (Hg/ml) (induktor: trombin) 2. példa 0,15 3. példa 0,3 4. példa 0,3 6. példa 0,15 7. példa 0,75 10. példa 0,3 11. példa 0,15 14. példa 0,30 15. példa 0,75 17. példa 1.5 18. példa 3,0 19. példa 0,07 20. példa 0,15 21. példa 0,15 22. példa 0,75 23. példa 0,15 24. példa 1,5 25. példa 6,0 ii) In vitro értágító hatás: Az (I) általános képletű nitroalifás vegyületek értágító hatását szuperfúziós módszerrel határoztuk meg. A módszer leírását az alábbiakban adjuk meg: Hím, 8-10 hetes Sprague-Dawly patkányokat fejükre mért ütéssel elpusztítottunk, majd gyorsan eltávolítottuk a mellkasi aortát. A zsírszövetek eltávolítása után az aortákból 2 mm széles és 50 mm hosszú spirális szalagokat készítettünk, melyeket 1 g maradék tenzió mellett 30 ml fürdőben felfüggesztettünk, mely 37 °C hőmérsékleten 95 % oxigén és 5 % széndioxid elegyével oxigénezett, következő összetételű Tyrode-oldat volt: NaCl 137 mmól/1 (8 g/liter), KCI 2,7 mmól/1 (0,2 g/liter), CaCb x 2 H2O 1,8 mmól/1 (0,264 g/liter), MgCte x 6 H2O 1,02 mmól/1 (0,208 g/liter), NaHCC>3 11,9 mmól/1 (1 g/liter), NaH2P04 x 2 H2O 0,42 mmól/1 (0,066 g/liter) és glükóz 5,55 mmól/1 (1 g/liter). A szöveteket 90 percen át ekvilibráltuk, majd 10 ml/perc Tyrode-oldattal és 0,6 |ig/m! noradrenalin-só 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
