200481. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, természetes LH-RH antagonista hatású peptidek, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 200481 B 2 p-Glu piroglutamil, Lys lizil, His hisztidil, Arg arginil, Gly glicil, Pro prolii, Met metionil, Ser szeril, Leu leucil, Tyr tirozil, Phe fenilalanil, Ala alanil, Trp triptofil, Bal(2) 3-[benzo(B)tién-2-il]-alanil, Bal(3) 3-[benzo(B)tién-3-il]-alanil, Nal(2) 3-(2-naftil)-alanil, Har(Et)2 N ’ ,N”-dietil-homoarginil, Thz tiaproiil, Cys(Bzl) ciszteinil-benziléter Cys(CH3) ciszteinil-metiléter, Cys ciszteinil. A találmányt a következő példákkal illusztráljuk anélkül, hogy a találmányt a példákra korlátoznánk. Amennyiben ezt másképp nem jelöljük, az aminosav L-formáját értjük. 1. példa Ac-D-Bal(3)-D-p.Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2-acetát előállítása 621 mg (1 mmól) Ac-D-Bal(3)-D-p.Cl-Phe-D-Trp-OH és 1 g (—1 mmól) H-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 10 ml dimetil-formamidban oldott elegyéhez annyi N-etil-morfolint adunk, amennyi az oldat pH-jának 7-re való beállításához szükséges. Ezután az elegyet 0 ”C-ra hűtjük és 200 mg (1,5 mmól) 1-hidroxí-benzotriazolt és 230 mg (1,1 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá egymás után keverés közben. A reakcióelegyet 3 órán keresztül keverjük 5 'C-on és 16 órán keresztül szobahőmérsékleten. Ezután a kapott diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet bepároljuk. Az így kapott olajat 25 ml etil-acetáttal keveijük és így a kiváló nyersterméket leszűrjük. Az anyagot 25 ml terc-butanol/víz 1:1 arányú elegyében oldjuk és 10 ml acetát-formában lévő (Dowex) ioncserélő gyantát adunk hozzá a dekapeptid acetát sójának előállítása céljából. Miután az ioncserélő gyantát leszűrjük, a szűrletet liofilizáljuk és az így kapott terméket tovább tisztítjuk oszlopkromatográfiás módszerrel. (Oszlop: szilícium-dioxid; eluens: butanol/piridin/ecetsav/víz 8:0,75:0,25:1). A cím szerinti anyagot tartalmazó frakciókat bepároljuk és liofilizáljuk. 650 mg terméket kapunk. Rf=0,53, butanol/piridin/ecetsav/víz 4:0,75:0,25:1 arányú elegyében (szilícium-dioxidon). [<x]d=-3,7 'C (c=0,5; dimetil-formamidban). 2 2. példa A következő vegyöleteket az 1. példával analóg módon állítjuk elő: 1. Ac-D-Bal(2)-D-p.Cl Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2; 2. Ac-D-p.Cl Phe-D-p.Cl Phe-D-Bal(3)-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2; 3. Ac-D-Bal(2)-D-p.Cl Phe-D-Bal(3)-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-Nfh; 4. H-D-Bal(3)-D-p.Cl Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2; 5. Ac-D-Nal(2)-D-p.Cl Phe-D-Bal(3)-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2; 6. Ac-D-p.Cl Phe-D-p.Cl Phe-D-Bal(3)-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Aig-Pro-D-Ala-Nlfe; 7. Ac-D-p.Cl Phe-D-p.Cl Phe-D-Bal(2)-Ser-Tyr-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2; 8. Ac-D-Nal(2)-D-p.Cl Phe-D-Bal(3)-Ser-Tyr-D-Har(Et)2-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2; 9. Ac-D-p.Cl Phe-D-p.Cl Phe-D-Bal(3)-Ser-iyr-D-Har(Et)2-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2; 10. Ac-D-Bal(2)-D-p.Cl Phe-D-Bal(3)-Ser-Tyr-D-Har(Et)2-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2. A fentiekben felsorolt vegyületek fizikai állandói a következők (a forgatóképességi értékeket dimetil-formamidban 1 t%-os koncentráció mellett mértük, míg az Rf-értékek meghatározásához futtatószeiként butanol, piridin, ecetsav és víz 4:0,75:0,25:1 térfogatarányú elegyét használtuk). Vegyület [«Id Rf 1.-3,3 0,52 2.-6,7 0,48 3.-2,3 0,52 4.-2,5 0,47 5.-5,7 0,42 6.-4,9 0,30 7.-4,4 0,46 8.-2,5 0,39 9.-3,2 0,39 10.-2,7 0,36 3. példa Ac-D-Nal(2)-D-p.CI Phe-D-Bal(3)-Ser-Tyr-D-Arg- Met-Arg-Pro-D -A la-NH2 -acetát előállítása 642 mg (1 mmól) Ac-D-Nal(2)-D-p.Cl Phe-D-Bal(3)-OH és 1 g (~1 mmól) H-Ser-Tyr-D-Arg-Met-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (melyet a Boc-Ser-Tyr-D-Arg-Met-Arg-Pro-D-Ala-NH2 szegmensről az N-védőcsoportnak trifluor-ecetsavval való eltávolítása révén nyerünk) 10 ml dimetil-formamidos oldatához annyi N-etil-morfolint adunk, amennyi az oldat pH-jának 7-re való beállításához elegendő. Ezt az oldatot 5 °C-ra hűtjük és 200 mg (1,5 mmól) hidroxi-benzotriazolt és 230 mg (1,1 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet 3 órán keresztül keverjük 5 ”C-on és 16 órán keresztül szobahőmérsékleten. Ezután a kapott diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet bepároljuk. Az így kapott olajat 25 ml etil-acetáttal eldörzsöljük, így a nyerstennék kiválik. Az így kapott anyagot 25 ml terc-butanol/víz 1:1 térfogatarányú elegyében oldjuk és 10 ml acetát formában lévő (Dowex) ioncserélő gyantát adunk hozzá, hogy a dekapeptid acetát sóját kapjuk. Miután az ioncserélő gyantát leszűrjük, a szűrletet liofilizáljuk és tovább tisztítjuk oszlopkromatográfiás módszerrel (Oszlop: szilícium-dioxid, eluens: butanol/piridin/ecetsav/víz 8:0,75:0,25:1 térfogatarányú elegye). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
