200480. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az alpha-melanotropin nyíltláncú és gyűrűs analógjai előállítására

HU 200480 B

o

8. példa

Ac-[Nle4Asp5,D-Phe7Dprlo]-a-MSH4-loNH2 A cím szerinti vegyület védett, gyantához kötött formáját az 5. példában leírt módon állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy az ott alkalmazott, az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és az epszilon-amino-csoporton 2-klór-benziloxi-karbonil-csoporttal védett lizin helyett a jelen példában az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és a ß-amino-csoporton benziloxi-karbonil-csoporttal védett 2,3-diamino-propionsavat, továbbá az 5. példában alkalmazott, az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett glutaminsav-gamma-benzil-észter helyett a jelen példában az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aszparaginsav-ß-benzil-ösztert használunk. Ily módon az

Ac-Nle-Asp(ß-Bzl)-His(Nim-Tos)-D-Phe-Arg-(N§-Tos)-Trp(N‘-For)-Dpr(Nß-Z)-p-MBHA képletű, pepiidet hordozó gyantát kapjuk. A peptidet ezután lehasítjuk a gyantáról, és a továbbiakban az

5. példában leírt módon dolgozzuk fel. Ily módon fehérszínű, porszerű anyag formájában 36 %-os hozammal kapjuk a kívánt peptidet.

[<x]54623= -53.7° (c=0,03, 10 % ecetsav),

Rf=0,41 [ 1 -butanol/ecetsav/piridin/víz (5:5:1:4 tf)].

9. példa

Ac-[Nle4,Lyslo]-a-MSH4-ioNH2 A cím szerinti vegyület védett, gyantához kötött formáját az 5. példában leírt módon állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy az ott alkalmazott, az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett D-fenil-alanin helyett a jelen példában az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett fenil-alalnint használunk. Ily módon az

Ac-Nle-Glu(gamma-Bzl)-His(Nim-Tos]-Phe-Arg (N§-Tos)-Tip(N'-For)-Lys(Ne-2-ClZ)-p-MBHA képletű, védett peptidet hordozó gyantához jutunk. Ezután a peptidet lehasítjuk, és tovább feldolgozzuk, ily módon 40 %-os hozammal kapjuk a cím szerinti vegyületet.

[a]54ó23= -25.0° (c=0,02, 10 % ecetsav),

Rp=0,34 [ 1-butanol/ecetsav/piridin/víz (5:5:1:4 tf)].

10. példa

Ac-[NLe4 As/P .Lys,(>]-(X-MSH4-10NH2

A cím szerinti vegyület védett, gyantához kötött formáját az 5. példában leírt módon állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy a kapcsolások során az ott alkalmazott, az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett D-fenil-alanin helyett a jelen példában az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett fenil-alanint használunk, továbbá az 5. példában alkalmazott, az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett glutaminsav-gamma-benzil-észter helyett a jelen példában az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aszparaginsav^-benzil-észtert használunk. Ily módon az

Ac-Nle-Asp(ß-Bzl)-Phe-Ara(N?-Tos)-Trp(N'-For)-Lys(Nt-2-ClZ)-p-MBHA

képletű, védett peptidláncot hordozó gyantához jutunk. Ezután a peptidet lehasítjuk a gyantáról, a védőcsoportokat eltávolítjuk, és a cím szerinti vegyületet a fent leírt módon megtisztítjuk. Ily módon fehér színű porszerű anyag formájában 37 %-os hozammal kapjuk a terméket.

[a]54623= -24,6° (c=0,16, 10 % ecetsav),

Rf=0.32 [ 1-butanol/ecetsav/piridin/víz (5:5:1:4 tf)].

A fenti példákban leírt módon előállított, nyíltláncú analógok biológiai hatását az alábbi táblázatban foglaljuk össze, a táblázatban a „P” jelzés nyújtott hatást jelöl („+” = igen, = nem), az „NV” jelzés pedig azt jelenti, hogy az adott mintát nem vizsgáltuk.

Analóg Biológiai hatás Maradék hatás

sorszáma Béka Gyík Béka Gyík

I.

1,0

1,0

P H

P (-)

2.

6,0

8,0

P (+)

P (-)

3.

9,0

8,0

P (+)

PH

4.

0,8

8,0

P (+)

P (+)

5.

1,0

10,0

P (+)

P (+)

6.

0,1

8,0

P (-)

P (-)

7.

0,2

8,0

P (-)

P (-)

8.

0,7

8,0

P H

P(-)

9.

0,6

8,0

P H

P (-)

10.

0,9

10,0

NV

P (-)

11.

0,9

10,0

P (±)

P (±)

12.

0,9

50,0

P (-)

P(-)

13.

0,2

8,0

P M

P (-)

14.

0,001

0,08

P (+)

P (-)

.15.

0,004

0,08

P (+)

P (-)

Az a-melanotropin rögzített konformációjú, nyíltláncú analógjaival kapott eredmények alapján megvizsgáltunk egy sor más típusú, ugyancsak rögzített konformációjú, de gyűrűs a-melanotropin-analógot.

A melanotropin gyűrűs peptid-analógjait a szilárd fázisú peptid-szintézis szokásos, önmagában ismert módszereivel állítjuk elő. Összefoglalva: úgy járunk el, hogy egy p-metil-benzhidril-amin-tipusú gyantához egymás után hozzákapcsoljuk az a-aminocsoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aminosavakat vagy ezek származékait, e célra a tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aminosavat háromszoros fölöslegben használjuk, és segédanyagként 2,4-szeres fölöslegű N-hidroxi-benzotriazolt használunk 1 mmól/ml koncentrációjú, dimetil-formamidos oldata formájában (kivéve a hisztidint), továbbá 2,4- szeres fölöslegben vett, 1 mmól/ml koncentrációjú, dimetil-formamidos diciklohexil-karbodiimid-oldatot. A kapcsolási reakciókat diklór-metánban, 1-3 órás reakcióidővel végezzük, és a reakció előrehaladását a ninhidrines és/vagy klór-anilos próbával követjük. Szükség esetén a kapcsolási reakciókat megismételjük.

Az aminosavak oldalláncában szereplő reakcióképes csoportokat az alábbi védőcsoportokkal védjük:- a lizin epszilon-amino-csoportját 2,4-diklór-benziloxi-karbonil-csoporttal;

- az ornitin. 2.4-diamino-vajsav és a 2.3-diamino-propionsav ß-amino-csoportjat benziloxi-karbonil-csoporttal;

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

9