200480. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az alpha-melanotropin nyíltláncú és gyűrűs analógjai előállítására
1 HU 200480 B •> talmaz) diklór-metánban szuszpendálunk, és háromszor 30 ml diklór-metánnal mossuk. A kimosott gyantát 2 órán át diklór-metánnal rázatjuk. majd kiszűrjük. Az így duzzasztott p-metil-benzhidril-amin-típusú gyantát semlegesítjük, majd az 1. példában leírt módon, az itt megadott sorrendben hozzákapcsoljuk az alábbi aminosavakat:- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, az e-amino-csoporton pedig 2-klór-benziloxi-karbonil-csoporttal védett D-lizin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, az indol-gyűrűrendszer nitrogénatomján pedig fonnilcsopoittal védett triptofán,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, a guanidinocsoport nitrogénatomján pedig p-toluol-szulfonil-csoporttal védett arginin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett D-fenil-alanin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, az imidazolgyűrű nitrogénatomján pedig p-toluol-szulfonil-csoporttal védett hisztidin. Az íny kapott Boc-His(N'm-Tos)-D-Phe-Arg(NS-Tos)-Trp (N‘-For)-Lys(Ne-2-ClZ)-p-MBHA képletű, védett peptidláncot hordozó gyantát két részre osztjuk. Az egyik részlethez hozzákapcsolunk először az a-amino-csoportján tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett glutaminsav-gamma-benzil-észtert, majd ezután az a-amino-csoportján tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett norleucint. Az így kapott, gyantához kötött pepiid N-terminálisáról a védőcsoportot lehasítjuk. majd a szabaddá tett N-terminálist ecetsav-anhidrid és piridin 1:1 arányú elegyének kétszeres fölöslegével diklór-metánban, egy órás reakcióidővel megacetilezzük. Az így kapott, védett peptidláncot hordozó gyantát diklór-metánnal mossuk, és csökkentett nyomáson megszárítjuk, ily módon 2,1 g terméket kapunk. A védett peptidet hordozó gyanta 1.7 g súlyú részletét 17 ml vízmentes, cseppfolyós fluor-hidrogénsav, 2 ml anizol és 1 ml 1,2-etán-ditiol elegyével kezeljük. Az illékony részeket ledesztilláljuk, a maradékot megszárítjuk, háromszor 30 ml vízmentes dietil-éterrel mossuk, és háromszor 30 ml 30 %-os, vizes ecetsavval kivonatoljuk. A peptid vizes kivonatát fagyasztva szárítjuk, ily módon 700 mg nyers peptidet kapunk. Ennek a nyers pepiidnek egy 300 mg súlyú mintáját feloldjuk 2 ml ammónium-acetát puffer-oldatban (pH=4,5), és az oldatot egy szűrőbetéten átszűrve felvisszük egy karboxi-metil-cellulózzal töltött oszlop tetejére. A főterméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk, ily módon fehérszínű, porszerű anyag formájában 172 mg peptidet kapunk. 110 mg így kapott peptidet nagyfelbontású folyadék-kromatográfiás módszerrel tovább tisztítunk, ily módon 50 mg tiszta, cím szerinti peptidhez jutunk. [a]5462-'= -50.0° (c=0,12. 10 % ecetsav), Rt—0.35 [ 1-buianol/ecetsav/piridin/víz (5:5:1:4 tf)]. 6. példa Ac-lNte4 Asi>\D-Phe7 Lys‘°l-o,MSH4-ioNH2 A cím szerinti vegyületet gyantához kötött, védett formában úgy állítjuk elő. hogy 1.8 g Boc-His(Nim-Tos)-D-Phe-Arg(NS-Tos)-Trp (N'-For)-Lys(Ne-2-ClZ)-p-MBHA képletű, gyantához kötött peptidhez stepwise módszerrel hozzákapcsolunk először az a-amino-csoportján tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aszparaginsav-ß-benzil-üsztert, majd ezután az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett norleucint. Valamennyi kapcsolást a fentiekben leírt módon, az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aminosav (vagy származéka) háromszoros fölöslegével, a diciklohexil-karbodiimid 2,4-szeres fölöslegével, és az 1-hidroxi-benzotriazol 2,4-szeres fölöslegével végezzük el. Az utóbbi aminosav hozzákapcsolása után az a-amino-csoport védőcsoportját, vagyis a tercier-butoxi-karbonil-csoportot lehasítjuk, az aminocsoportot semlegesítjük, majd ecetsav-anhidrid és piridin 1:1 arányú elegyének kétszeres fölöslegével, diklór-metánban, egy órás reakcióidővel megacetilezzük. Az így kapott, Ac-Nle-Asp(ß-BzL)-His(Nim-Tos)-D-Phe-Arg-(N£-Tos)-Trp(N'-For)-Lys(Ne-2-ClZ)-p-MHBA képletű, védett peptidet hordozó gyantát diklór-metánnal mossuk, és csökkentett nyomáson megszárítjuk, súlya: 2,1 g. Ennek a védett peptidet hordozó gyantának egy 1,5 g súlyú részletét cseppfolyós fluor-hidrogénsavval kezeljük, majd a továbbiakban az 5. példában leírt módon dolgozzuk fel. Ily módon a karboxi-metil-cellulózon végzett kromatografálás után 112 mg terméket kapunk, majd ezt nagyfelbontású folyadék-kromatográfiás módszerrel tovább tisztítjuk. Ily módon 64 mg tiszta peptidet kapunk. [a]54o—’= -28.0° (c=0.05, 10 % ecetsav), Rf=0,36 [ 1 -butanol/ecetsav/piridin/víz (5:5:1:4 tf)]. 7. példa Ac-[NIe4Asp5D-Phe6 7,Dab'Q]-o.-MSH4-loNH2 A cím szerinti vegyület védett, gyantához kötött formáját az 5. példában leírt módon állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy az ott alkalmazott, az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal. és az epszilon-amino-csoporton 2-klór-benziloxi-karbonil-csoporttal védett lizin és az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett glutaminsav-gamma-benzil-észter helyett a jelen példában az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és a gamma-amino-csoporton benziloxi-karbonil-csoporttal védett 2,4-diamino-vajsavat és az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aszparaginsav-ß-benziMsztert használunk. Ily módon a Ac-Nle-Asp(ß-Bzl)-His(Nim-Tos)-D-Phe-Arc(NS-Tos)-Trp-(Ni-For)-Dab(N£amma-Z)-p-MBHA képletű, védett peptidet hordozó gyantához jutunk. Ezt a terméket az 5. példában leírt módon elhasítva, és tovább feldolgozva fehérszínű, porszerű anyag formájában 36 %-os hozammal kapjuk a 12-es számú peptidet. la]54623=-32.7° (c=0.11, 10 % ecetsav), R 1=0.43 [ 1 -butanol/ecetsav/piridin/víz (5:5:1:4 tf)]. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
