200480. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az alpha-melanotropin nyíltláncú és gyűrűs analógjai előállítására
HU 200480 B semlegesítjük, és a kapott vegyületet all. példában leírt módon megacetilezzük. Ily módon az Ac-Nle-Asp(ß-Bzl)-His(Nim-Tos)-D-Phe-Arg (Ng-Tos)-Trp(N'-For)-Lys(Ne-2,4-Cl2Z)-p-MBHA képletű, védett peptidláncot hordozó gyantát kapjuk. Ezt a peptidláncot hordozó gyantát csökkentett nyomáson megszárítjuk, majd egy 1,0 g súlyú mintáját hasítási reakcióba visszük, és a terméket a 11. példában leírt módon dolgozzuk fel. Ily módon 370 mg nyers Ac-[Nle4,Asp-‘i,D-Phe7,Lys10]-a-MSH4-ioNH2 képletű terméket kapunk. A nyers heptapeptid egy 110 mg súlyú részletét all. példában leírt módszerekkel megtisztítjuk, ily módon fehér színű, porszerű anyag formájában 82 mg olyan terméket kapunk, amely a cím szerinti peptid nyíltláncú változata. Az Ac-[Nle4,Asp5,D-Phe7,Lys l0]-a-MSH4-i 0NH2 képletű vegyület egy 40,0 mg súlyú részletét gyűrűzárási reakcióba visszük, majd a terméket a reakcióelegy feldolgozása után nagyfelbontású folyadék-kromatográfiával megtisztítjuk. Ily módon 12 mg tiszta Ac-[Nle4,Asp5,D-Phe7,Lyslo]-a-MSH4-ioNH2 képletű terméket kapunk. [cc]598~= -54,2° (c=0,07, 10 % ecetsav), Rf=0,73 (1-butanol/ecetsav/piridin/víz (15:3:10:12 tf)]. 14. példa ---------------Ac-[Nie4 Asps,D-Phe7,Orn,0]-O.-MSH4-I0NH2 1,0 g p-metil-benzhidril-amin gyantához (amely grammonként 0,7 mmól aminocsoportot tartalmaz) a szilárd fázisú peptid-szintézisre általánosságban leírt műveletsor segítségével hozzákapcsolunk az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal és a gamma-amino-csoporton benziloxi-karbonil-csoporttal védett omitint. Egy órás reagáltatás után a kapcsolási reakciót leállítjuk, a gyantát kimossuk, semlegesítjük, és a gyanta szabad aminocsoportjait ecetsav-anhidrid és piridín 1:1 arányú elegyének kétszeres fölöslegével diklór-metánban megacetilezzük, reakcióidőd 1 óra. Ezután az így kapott vegyülethez a alábbi sorrendben, stepwise módszerrel hozzákapcsoljuk a következő aminosavakat:- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és az indol-gyűrűrendszer nitrogénatomján formilcsoporttal védett triptofán,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és a guanidinocsoporton p-toluol-szuflonil-csoporttal védett arginin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett D-fenil-alanin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és az imidazolgyűrű nitrogénatomján p-toluol-szulfonil-csoporttal védett hisztidin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karboníl-csoporttal védett aszparaginsav-ß-benzil-dszter, és- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett norleucin. Valamennyi kapcsolást a szilárd f ázisú peptid-szintézisre általánosságban leírt kapcsolási műveletsor segítségével hajtjuk végre. Az utolsó aminosav hozzákapcsolása után az a-amino-csoportot védő tercier-butoxi-karbonil-csoportot lehasítjuk, az N-terminális aminocsoportot semlegesítjük, és megacetilezzük. Ily módon az Ac-Nle-Asp(ß-Bzl)-His(Nim-Tos)-D-Phe-Ara(NS-Tos)-Trp-(Ni-For)-Orn(NSamma-Z)-p-MBHA képletű, védett peptidláncot hordozó gyantához jutunk. Ezt a terméket csökkentett nyomáson megszárítjuk, majd egy 1,0 g súlyú részletét hasítási reakcióba visszük, és a kapott terméket all. példában leírt módon feldolgozzuk. Ily módon 332 mg nyers, Ac- [Nie4, Aspa,D-Phe7,Om1 °]-a-MSH4-10NH2 képletű terméket kapunk. A nyers heptapeptid egy 105 mg súlyú részletét a 11. példában leírt módon megtisztítjuk, ily módon fehérszínű, porszerű anyag formájában 78 mg nyíltláncú peptidet kapunk. A tiszta Ac-[Nle4,Asp5,-D-Phe7,Om 10]-a-MSH4-i 0NH2 képletű peptid egy 40,0 mg súlyú részletét all. példában leírt gyűrűzárási reakcióba visszük. Megfelelő feldolgozás után ily módon 15 mg tiszta Ac-[Nle4,Asp5,D-Phe7,Om10]-a-MSH4-ioNH2 képletű terméket kapunk. [oc]589“= -37,1° (c=0,07, 10 % ecetsav), Rf=0,71 [ 1 -butanol/ecetsav/piridin/víz (15:3:10:12 tf)]. 15. példa ----------------. Ac-[Nle4 Asp5 D-Phe7 £>ahlo]-<x-MSH4-ioNH2 1,0 g (0,7 mmól/g) p-metil-benzhidril-amin gyantához a szilárd fázisú peptid-szintézisre általánosságban leírt műveletsor segítségével hozzákapcsolunk az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal és a gamma-amino-csoporton benziloxi-karbonil-csoporttal védett 2,4-diamino-vajsavat. Egy órás kapcsolási reakcióidő után a rekciót leállítjuk, a gyantát kimossuk, semlegesítjük, és a gyanta reagálatlan aminocsoportjait ecetsav-anhidrid és piridin 1:1 arányú elegyének egyszeres fölöslegével diklór-metánban, 1 órás reakcióidővel megacetilezzük. Ezután a gyantához stepwise módszerrel, az alábbi sorrendben hozzákapcsoljuk a következő aminosavakat:- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és az indol-gyűrűrendszer nitrogénatomján formilcsoporttal védett triptofán,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és a guanidinocsoporton p-toluol-szulfonil-csoporttal védett arginin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett D-fenil-alanin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal, és az imidazolgyűrű nitrogénatomján p-toluol-szulfonil-csoporttal védett hisztidin,- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aszparaginsav-ß-benzil-0szter, és- az a-amino-csoporton tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett norleucin. Az utolsó aminosav hozzákapcsolása után az a-amino-csoportot védő tercier-butoxi-karbonil-csoportot lehasítjuk, az N-terminális aminocsoportot semlegesítjük, és a 11. példában leírt módon megacetilezzük. Ily módon az Ac-Nle-Asp(ß-Bzl)-His(Nim-Tos)-D-Phe-Arg (NS-Tos)-Trp-(N'-For)-Dab(N8amma-Z)-p-MBHA képletű, védett peptidláncot hordozó gyantát kapjuk. Ezt a terméket csökkentett nyomáson megszárítjuk, majd egy 1,0 g súlyú részletét hasítási reakcióba visszük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
