200479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunimpressziós aktivitással rendelkező peptidek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

HU 200479 B 2

gadónak (vagy nem maga az egyén), a befogadó limfocitái „nem-saját”-nak minősítik az átültetett szövetet és azonnal úgy válaszolnak, hogy lebontják azt Ilyen esetben kivételt képeznek az érrel be nem hálózott területekre (kivételes helyekre) történő átül- 5 tetések. Ilyen terület pl. a szem szaruhártyája, amelyben limfociták nem cirkulálnak, ezért nem szenzibilizálódnak és nem idézik elő immunválasz fellépését. Jelenleg nehézségekbe ütközik az immunreakció elnyomása, ha az átültetett szövet kivetését kívánjuk 10 megakadályozni, anélkül, hogy a beteg valamilyen más módon ne károsodjék. A betegnek egyidejűleg igen magas antibiotikum dózisokat kell adni, mivel elnyomtuk saját, a fertőzések leküzdésére szolgáló védelmi rendszerét. A találmány szerinti vegyületek 15 és készítmények értékesek lehetnek abból a szempontból, hogy az immunrendszer ellenőrzött modulálása révén kiválthatják a szervezet tűrőképességét az átültetett szövettel szemben.

Jelentősek tehát azok a vegyületek, pl. a találmány 20 szerinti vegyületek, amelyek elnyomják az immunrendszert. Különösen akkor hasznosak, ha a rendszer normális reakcióiban zavarok léptek fel, vagy ez a mechanizmus álrtalmatlan idegen anyagok, pl. átültetett szervek kivetését okozta. 25

A fent elmondottakat részletesebben ismerteti az „Immunology: A Synthesis” E. S. Golub, Sinauer Associates Inc., Suderland, Massachuesetts (1989) kézikönyv.

A találmány tárgya eljárás Tn-A-B-C-D-Tc, azaz 30

(I) általános képletű vegyületek előállítására; e képletben

Tn jelentése hidrogénatom,

A jelentése 35

-Leu-Arg-Lys-Leu-Arg-, -Thr-Arg-Leu-Thr-Arg-,-Leu-Gln-Asn-,-Glu-Val-Val-Leu-Gln-Asn-, és

valamennyi peptidrészben a 40

Leu helyett Ile,

az Asp helyett Glu,

az Asn helyett Gin szerepelhet,

B jelentése 2 aminosav-maradékot

tartalmazó peptid-fragmentum, 45

amely aminosav Arg vagy Lys lehet,

C jelentése 2 aminosav-maradékot

tartalmazó peptid-fragmentum, amely aminosav Gly, Leu, lie lehet,

D jelentése 50

-Arg-Asp-Ala-Asp-Asp-Leu-, -Lys-Leu-Ala-Thr-Ala-Leu-, -Asp-Leu-Leu-Phe-Leu-Lys-Glu-Gly-Gly-Leu—Leu-, és

valamennyi peptidrészben a 55

Leu helyett Ile,

az Asp helyett Glu szerepelhet,

Te jelentése egy karboxi-terminális

maradék, mégpedig -OH vagy aminocsoport. 60

A találmány szerinti vegyületek hasznos immunszupresszív szerek.

A természetben előforduló aminosavak jelölésére a leírásban a következő, általánosan ismert rövidítéseket alkalmazzuk: 65

Gly- glicin

Alá- alanin

Val- valin

Leu- leucin

De- izoleucin

Phe- fenilalanin

Thr- treonin

Asn

- aszparagin

Gin- glutamin

Asp- aszparaginsav

Glu- glutaminsav

Lys- lizin

Arg- arginin

A természetes aminosavak, a glicin kivételével, egy királis szénatomot tartalmaznak. Hacsak konkrétan másként nem tüntetjük fel, az itt tárgyalt optikailag aktív aminosavak L-konfigurációjúak. A szokásos módon a peptidek szerkezetét úgy írjuk fel, hogy az amino-terminális vég a lánc baloldalán, a karboxi-terminális vég pedig a lánc jobboldalán helyezkedik el.

A találmány szerinti eljárással előállított peptidekre néhány jellegzetes példa:

H-Thr-Arg-Leu-Thr-Arg-Lys-Arg-Gly-Leu-Lys--Leu-Ala-Thr-Ala-Leu-NH2;

H-Leu-Arg-Lys-Leu-Arg-Lys-Arg-Leu-Leu-Arg-Asp-Ala-Asp-Asp-Leu-NH2;

H-Leu-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Leu-Asp-Leu-Leu-Phe-Leu-Lys-Glu-Gly- Gly-Leu-NH2 és

H-Glu-Val-Val-Leu-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Leu-Leu-OH.

A találmány szerinti fehérjék számos eljárással előállíthatok, amelyek a szakember számára általánosan ismertek. Az ilyen eljárások közé tartozik a szilárd fázisú szekvenciális és blokk-szintézis. A szilárdfázisú szekvenciális eljárás a szokásos automatizált eljárásokkal hajtható végre, pl. egy automatikus peptid-szintetizáló berendezés segítségével. Ebben az eljárásban egy alfa-amino-védett aminosavat egy gyanta-hordozóhoz kapcsolunk. Gyanta-hordozóként bármely megfelelő gyantát alkalmazhatunk, amelyet a szakterületen polipeptidek szilárdfázisú előállításához alkalmaznak. Előnyös az olyan polistirol alkalmazása, amelyben 0,5 - kb. 3 % divinil-benzol hozzáadásával keresztkötéseket alakítottunk ki és amelyet klórmetileztünk vagy hidroximetileztünk annak érdekében, hogy megfelelő helyeket alakítsunk ki az eredetileg bevitt alfa-amino-védett aminosavval való észter-képzéshez.

Egy példát a hidroximetil-gyantára Bodanszky et al. ír le (Chem. Ind., London, 38, 1597-98, 1966). A Bio Rád Laboratories (Richmond, Kalifornia) hoz forgalomban egy klórmetilezett gyantát és egy ilyen gyanta előállítását írja le Stewart et al. (Solid Phase Peptide Synthesis, Freeman & Co., San Francisco, 1969, 1. Fejezet, p. 1-6.). A védett aminosav Gisin eljárásával (Helv. Chim. Acta 56,1476, 1973) köthető a gyantához. A kereskedelemben számos, gyantához kötött védett aminosav férhető hozzá. Egy olyan, a találmány szerinti polipeptid előállítására pl., amelyben a karboxi-terminális vég egy Thr maradék, egy benzilezett, hidroximetilezett fenil-acetamidometil-gyantához (RAM) kötött, terc-butil-oxikarbonil(Boc)—csoporttal védett Thr alkalmazható, amely termék a kereskedelemben hozzáférhető.

4