200474. lajstromszámú szabadalom • Eljárás renin-gátló di- és tripeptidek, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 200474 B o betűs kódoknak [pl. Europ. J. Biochem. 138, 9-37 (1984)]. Ellenkező értelmű megjelölés hiányában az aminosav mindig L-konfigurációban áll. Az .,R" megjelölés, például az „Ile—B—NH2" megjelölés olyan amidkötést jelent, amelyben a karbonilcsoportot metiléncsoport helyettesíti. Az Rr értékek meghatározását Kieselgé! 60 állófázison végezzük. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példákkal világítjuk meg. anélkül, hogy az oltalmi kör a példákra korlátozódna. 1. összehasonlító példa Boc-Phe-His-ACHPA-Leu-B—NH-> 80 mg Boc-Phe-His-ACHPA-Leu-S-NHZ-t 10 ml metanolban oldva 50 mg Pd/aktív szén (10 %) katalizátoron atmoszférikus nyomáson H;-vel hidrogénezzük szobahőmérsékleten 6 órán keresztül. Ezután a katalizátort kieselgur-on kiszűrjük. A szűrletet bepároljuk és liofilizáljuk. amelynek során színtelen port kapunk. Rf=( EE/metanol 1:1) 0.15: MS (FAB): 698 (M+l). a) Boc-Phe-His-ACHPA-Leu-B—NHZ 230 mg Boc-Phe-His(DNP)-ACHPA-Leu-S-NHZ-t 5 ml dimetil-formamidban 0.5 ml tiofenollal 3 órán keresztül szobahőmérsékleten keverünk. Ezután vákuumban bepároljuk és diizopropil-éterrel háromszor digeráljuk. Kieselgélen kromatografáljuk (futtatószer: EE/metanol 15:1) és a terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk. lay színtelen port kapunk. Rr (EE/MeOH 5:1) = 0.5: MS (FAB): 832 (M+l). b) Boc-Phe-His(DNP)-ACHPA-Leu-B-NHZ 192 mg Boc-Phe-His(DNP)-OH. 30 pl piridin és 50 pl N-etil-piperidin 10 ml CH’Cb-ben felvett elegyéhez -5 °C hőmérsékleten 44 pl pivaloil-kloridot adunk. Az elegyet 30 percen keresztül +5 - +10 °C közötti hőmérsékleten keverjük, majd -10 °C hőmérsékletre hűtjük és 165 mg H-ÁCHPA-Leu—B—NHZ 5 ml CH2Cl:-ben felvett elegyét csepegtetjük hozzá. A reakcióelegyet 16 órán keresztül hűtés nélkül keverjük, majd vákuumban bepároljuk és 100 ml EE-ben felvesszük. Vizes kálium-karbonát oldattal háromszor, vízzel egyszer extraháljuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Kieselgélen kromatografáljuk (futtatószer: EE/metanol 10:1). amelynek során enyhén sárgás port kapunk. Rr (EE/metanol 10:1) = 0.5: MS (FAB): 998 (M+l). c) H-ACHPA-Leu-B-NHZ 200 mg Boc-ACHPA-Leu-B-NHZ-t 5 ml dioxánban oldunk és enyhe hűtés közben (+10 “C) 10 ml 12 %-os, dioxános sósavat adunk hozzá. Az elegyet 3 órán keresztül szobahőmérsékleten tartjuk, majd vákuumban bepároljuk, a maradékot vízben felvesszük, telített vizes nátrium-karbonát oldattal pH = 9-10 értékre állítjuk és EE-vel háromszor extraháljuk. Az extraktumot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A kapott cím szerinti termék további tisztítás nélkül a következő kapcsolási lépéshez felhasználható. d) A cím szerinti terméket Boc-Phe-O-N-Suc és H-His(DNP)-OH kiindulási anyagokból állítjuk elő az aktív észter módszerrel [J. Amer. Chem. Soc., 86. 1839 (1964)]. e) 250 mg Boc-ACHPA-OH [előállítás: J. Med. Chem., 28, 1779 (1985)] és 160 mg HOBt 10 ml tetrahidrofuránban felvett elegyéhez 0 °C hőmérsékleten 180 mg DCC 5 ml THF-ben felvett oldatát csepegtetjük. A reakcióelegyet 1 órán keresztül hűtés nélkül tároljuk, majd 0 °C hőmérsékleten 279 mg H-Leu-B-NHZ 10 ml THF-ben felvett oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet 16 órán keresztül szobahőmérsékleten tároljuk, majd szűrjük, bepároljuk és EE-ben oldjuk. Ezután telített vizes nátrium-karbonát oldattal kétszer és vízzel egyszer extraháljuk. Vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. Kieselgélen kromatografáljuk (futtatószer: EE/n-hexán 2:1). A cím szerinti vegyületet színtelen por alakjában kapjuk. Rr (EE/n-hexán) = 0.7: MS (FAB): 548 (M+l). f) H-Leu-B-NHZ Az le) összehasonlító példával analóg módon 350 mg Boc-Leu-B_NHZ kiindulási anyagból hab alakjában kapjuk a cím szerinti vegyületet. amely további tisztítás nélkül a következő kapcsoláshoz felhasználható. g) Boc-Leu-B_NHZ 600 mg Boc-Leu-R-amid és 693 mg Z-O-szukcinimid 10 ml DMF-ben felvett oldatát 16 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Ezután vákuumban bepároljuk és a maradékot EE-ben oldjuk, telített vizes nátrium-klorid oldattal kétszer, telített vizes kálium-hidrogén-szulfát oldattal kétszer és telített vizes nátrium-klorid oldattal egyszer extraháljuk. Vákuumban történő bepárlás után cím szerinti terméket kapjuk színtelen olaj formájában, amely további tisztítás nélkül felhasználható. Rr (EE) = 0,8; (FAB): 351 (M+l). h) Boc-Leu-B—amid 2,8 g Boc-Leu-nitrilt [előállítás: J. Amer. Chem. Soc., 88, 2033 (1966) cikkel analóg módon] előkezelt Raney-nikkellel [előkezelés: (1) vízzel, alaposan mossuk, (2) dekalinnal melegítjük és dekantáljuk, (3) metanolban szuszpendáljuk és dekantáljuk] 100 ml hígított ammóniás metanolban 2 órán keresztül szobahőmérsékleten hidrogénezzük. Szűrés és vákuumban történő bepárlás után a maradékot vizes 2n citromsavval pH=2 értékre állítjuk és CH2Cl2-vel háromszor extraháljuk. A vizes fázist vizes 2n nátrium-hidroxid oldattal pH=8-9 értékre állítjuk és CH2Cl2-veI háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves extraktumokat vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. Az enyhén sárga olaj további tisztítás nélkül felhasználható. Rr (metanol/1 % NH3) = 0.6: MS: 217 (M+l). 1. példa Etoc-Thi-His-ACHPA-Ile—B-NH2 280 mg Etoc-Thi-His-ACHPA-Ile—B—NHZ-t 3 ml 33 9í-os. jégecetes hidrogén-bromid oldatban oldunk és 3 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Ezután 50 ml telített vizes nátrium-karbonáttal elegyítjük. kétszer 50 ml EE-vel extraháljuk és vízmentes 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
