200473. lajstromszámú szabadalom • Eljárás difluor-ciklosztatint tartalmazó polipeptidek és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 200473 B 2 A találmány tárgya eljárás új difluor-ciklosztatint tartalmazó polipeptidek és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. A körülbelül 40.000 molekulasúlyú renint, mely egy proteolitikus enzim, a vese termeli és juttatja a véráramba. Ez az enzim ismert módon in vivo hasítja a természetben előforduló plazma-glikoproteint, az angiotenzint, humán angiotenzin esetén a 10. aminosav leucin és a 11. aminosav valin között, az angiotenzinogén (A) általános részképletű N-terminálisán. A renin hasítása során ily módon keletkezett angiotenzin I N-terminális dekapeptidet, mely a vérkeringésben van, a szervezet tovább bontja angiotenzin II-ként ismert oktapeptiddé. Az angiotenzin II hatékony presszor vegyület, azaz olyan vegyület, mely a vérnyomás jelentős növelésére képes, és hatását oly módon fejti ki, hogy a véredények összehúzódását és a mellékvesékben a nátrium-visszatartó aldoszteron hormon elválasztását idézi elő. Ily módon a renin-angiotenzinogén rendszer a hipertenzió és különböző szívbetegségek egy lehetséges előidézője. A renin-angiotenzinogén rendszer hátrányos működése megelőzésének egyik módja, hogy a szervezetbe olyan anyagot adagolunk, mely a renin-angiotenzinogént hasító aktivitását gátolja. Számos ilyen anyag ismert, ilyen például az antirenin-antitestek, pepsztatin és természetben előforduló foszfolipid-vegyületek. A 45,665 számú európai nyilvánosságra hozatali irat számos olyan renin-gátló polipeptid-származékot ismertet, melyek az X-Y-Pro-Phe-His-A-B-Z-W általános képletnek felelnek meg, ahol X jelentése hidrogénatom vagy amino-védőcsoport, Y adott esetben hiányozhat, B lipofil aminosav, Z valamely aromás aminosav, W hidroxilcsoport, és A többek között valamely (B) részképletű csoport, melyben R1 és R2 lipofil vagy aromás oldallánc. A fenti nyilvánosságra hozatali iratban található definíciók szerint nem történik említés olyan vegyületekrők, melyekben vagy A vagy Z sztatin és B lizin lenne. A 77,028A számú európai nyilvánosságra hozatali irat számos olyan renin-gátló polipeptidet ismertet, mely nem-terminális sztatin- vagy sztatin-származékot tartalmaz. Ezek közé a vegyületek közé tartozik például a fenil-alanin-hisztidin-sztatin szekvencia. A 132,304A számú európai nyilvánosságra hozatali irat sztatint tartalmazó polipeptideknek renin-gátló antihipertenzív szerekként történő alkalmazását ismerteti, míg a 114.993A számú európai nyilvánosságra hozatali irat olyan ciklosztatint tartalmazó polipeptideket ismertet, melyek renin-gátló antihipertenzív szerek. Bizonyos, sztatinnal rokon fluoro-ketonokat tartalmazó polipeptideket és azok pepszin-inhibitor hatásait is ismertetik Gelb és munkatársai, Biochemistry, 24, 1814 (1985) cikkükben. Úgy találtuk, hogy bizonyos, 5-ciklohexil-(S)-4- -amino-(S)- vagy (R)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentánsavat és 5-ciklohexil-4(R,S)-amino-3-oxo-2,2-difluor-pentánsavat tartalmazó polipeptidek renin-gátló szerekként alkalmazhatók, hipertenzió és bizonyos szívelégtelenségek kezelése során. A találmány szerinti új polipeptidek és polipeptid-származékok az (I) általános képletnek felelnek meg. A képletben X jelentése (a) vagy (b) képletű csoport, és Rl 1-3 szénatomos alkoxicsoport, vagy 1-3 szénatomos alkil-amino-csoport. Előnyösek azok a vegyületek, melyekben X (a) vagy (b) képletű csoport, és Rl metil-amino-csoport Ahol az lehetséges volt, a leírásban az aminosavak jelölésére általánosan alkalmazott rövidítéseket használtuk. így például a fenil-alanint Phe és a hisztidint a His jellel jelöltük. A terc-butoxi-kaibonil amino-védőcsoport rövidítése Boc, míg a hisztidin imidazolgyűrűjének védésére alkalmazott N-terc-butoxi-karbonil-csoportot imBoc-cal jelöljük. A szerkezetében fluoratomot tartalmazó, módosított ciklosztatin-maradékot a (C) részképlet jelöli, ahol X jelentése az előzőekben megadott. Ezeket a szerkezeteket abban az esetben, ha X (a) képletű csoport, 2,2-difluor-ciklohexilSta, míg ha X (b) képletű csoport, 2,2-difluor-epi-ciklohexilSta rövidítéssel jelöljük. A megfelelő ketonokat 2,2-difluor-3-oxo-ciklohexilSta-val jelöljük. A találmány szerinti vegyületekben, illetve a szabadalmi leírásban valamennyi természetben előforduló aminosav az L-konfigurációjában van jelen, hacsak másképpen nem említjük. Ugyancsak a találmány tárgya eljárás olyan terápiás szerek előállítására, melyek hatóanyagként az (I) általános képletű vegyületeket tartalmazzák. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek in vivo emlősökön, ideérte az embert is, antihipertenzív hatással rendelkeznek. Ezen hatás legalábbis részlegesen abból adódik, hogy e vegyületek az angiotenzinogének renin által történő hasadását gátolják. Anélkül, hogy a fenti mechanizmus elméletét részletesen kifejtenénk, valószínű, hogy a találmány szerinti vegyületek renin-gátló hatásáért azok reninhez történő szelektív kötődése (az angiotenzinogénnel összhasonlítva) felelős. A találmány szerinti vegyületek olyan enzimgátló hatást fejtenek ki, mely szelektív reninre nézve, és lényegesen magasabb, mint más enzimekkel, például katepszin D-vel szemben. Kis molekulasúlyuk következtében vizes közegben igen jól oldhatók, ezért orális adagolásra különösen alkalmasak, és szintézisük viszonylag gazdaságos. A találmány szerinti vegyületek ugyancsak alkalmasak szívelégtelenségek kezelésére is. A találmány szerinti vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy egy (V) általános képletű vegyületet jégecet-víz eleggyel kezelünk szobahőmérsékleten, majd a terméket izoláljuk. A kiindulási anyagok szintézise során egy aminosav védetlen a-amino-csoportját acilezzük valamely (acilezési célra) aktivált karboxilcsoporttal rendelkező aminosavval, mely egyidejűleg saját a-nitrogénatomján megfelelő védőcsoportot tartalmaz. Ily módon a két aminosav között peptidkötést alakítunk ki, majd lehasítjuk az előzőekben említett védőcsoportot. Ezt a kapcsolási és védőcsoport lehasítási műveletet ismételten végrehajtjuk polipeptid felépítésére a molekulaszerkezet C-terminális végétől kiindulva, és így eljutva az N-terminális végig. A találmány szerinti vegyületek előállítása során alkalmazott aminosavak kereskedelmi forgalomban, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
