200466. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-acetil-3-fluor-neuraminosav-származékok előállítására
1 HU 200466 B 2 A találmány tárgya eljárás új N-acetil-3-fluor-neuraminsav-származékok előállítására. Ismeretes, hogy a neuraminsav-származékok, mint például az N-acetil-neuraminsav, azaz a sziálsav-származékok az állatvilágban vagy bizonyos baktériumok sejtfelületén szialo-komplex (glikoprotein, glikolitid, oligoszaccharidok és poliszaccharidok) formájában fordulnak elő. Az utóbbi években kiderült, hogy a fenti sziálsav-származékok farmakológiai szempontból fontosak, így szerepet játszanak az idegi működésben, a rák, gyulladások, immunitás, vírusfertőzések, differenciálódás és a hormon receptorok működése területén, így figyelmet érdemelnek mint a sejt felületén elhelyezkedő különösen aktív molekulák. Ami a sziálsav-származék funkcióját az előbb említett sziálsav-komplexekben illeti, bár számos elméletet felállítottak, bizonyos pontok tisztázatlanok, és a találgatás tárgyát képezik. Annak érdekében, hogy a szerepét meg lehessen vizsgálni, fontossá vált, hogy a sziálsav-származékokat szintetizáljuk. A neuraminsav N-acetil-származékai, amelyek a fenti sziálsav alapszerkezetét képezik, természetes anyagokból nyerhetők. Ezeknek 2-helyzetben fluorozott származékai előállíthatok a M. N. Shana and R. Eby., Carbohydr. Rés., 127 p. 201 (1984) helyen ismertetett módszerrel, a 9-helyzetben fluorozott származékai pedig a M. Sharma and W. Koryntnyl, J. Carbohydr. Chem., 1, p. 331 (1982-1983) helyen ismertetett módszerrel. A találmány tárgya tehát eljárás az (I) általános képletű N-acetil-3-fluor-neuraminsav-származékok előállítására. A képletben R1 jelentése fluoratom, hidroxil- vagy -OCOCH3 képletű csoport, R2 jelentése hidrogénatom vagy rövid szénláncú alkilcsoport, R3 jelentése hidrogénatom vagy acetilcsoport. A találmány értelmében az (I) általános képletű vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy a (II) általános képletű a!kil-5-acetamid-2,6-anhidro-4,7,8,9-tetra-0- -acetil-2,3,5-tridezoxy-D-glicero-D-galakto-2-enoát - ahol R4 jelentése rövid szénláncú alkilcsoport és Ac jelentése acetilcsoport - ecetsavas vagy diklór-metános oldatát fluort tartalmazó inert gázzal vagy acetil-hipofluorittal reagáltatjuk. Az acetil-hipofluoritot úgy nyerjük, hogy fluort tartalmazó inert gázt vezetünk át ecetsav és valamilyen acetát, például kálium-acetát elegyén. A (II) általános képletű vegyületeket például az The 9th Saccharide Sympodium Lecture Summary, p. Bl 1 (1986) helyen ismertetett módszerrel állíthatjuk elő. Fluort tartalmazó inert gázként alkalmazhatunk 1-2 % fluort tartalmazó argont. Ha ezt a gázt a (II) általános képletű vegyület ecetsavas vagy diklór-metános oldatán 7 °C körüli hőmérsékleten 1-2 óra hosszat vezetjük át, olyan difluorozott terméket kapunk, amelyben a fluoratomok 2- és 3-helyzetben addíciálódnak cisz-konfigurációban. Ugyanakkor melléktermékként 2 monofluorozott terméket is kapunk, ahol a 2- és 3-helyzetben fluoratom. illetőleg -OCOCH3 képletű csoport helyezkedik el, cisz- és transz-konfigurációban. A kapott terméket a fenti reakcióelegyből úgy választjuk el és tisztítjuk, hogy az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk, a maradékot szilikagélen oszlopkromatografáljuk, eluálószerként etil-acetát és éter ele gyét használjuk, majd átkristályosítást végzünk. A termékek molekuláris szerkezetét, valamint sztereoszerkezetét 'H, l3C és 19F NMR spektrum és optikai forgatóképesség alapján határozzuk meg. A fenti addíciós reakció acetil-hipofluorittal is végrehajtható. Az acetil-hipofluoritot úgy készítjük, hogy 1-2 % fluort tartalmazó argont vezetünk át acetát, például kálium-acetát és ecetsav elegyéből álló tölteten. Amikor az így kapott acetil-hipofluoritot a (II) általános képletű vegyület ecetsavas vagy diklór-metános oldatán szobahőmérsékleten, 1-2 óra hosszat átvezetjük, fő termékként olyan monofluorozott terméket kapunk, amelyben 2- és 3-helyzetben -OCOCH3 és fluoratom helyezkedik el, cisz-konfigurációban. Ugyanakkor a difluorozott termék, amelyben a fluoratomok 2- és 3-helyzetben cisz-konfigurációban vannak, szintén képződik. Feltételezhető, hogy ez a difluorozott termék a fenti, acetátot és ecetsavat tartalmazó elegyen átvezetett, el nem reagált fluor addíciójával jön létre. A kapott reakcióelegy feldolgozását és tisztítását az említett szilikagéles oszlopkromatográfiás módszerrel végezzük. A monofluorozott termék molekulájának szerkezetét, beleértve a sztereoszerkezetet is, *H, 13C és ,9F NMR spektrum és optikai forgatóképesség alapján határozzuk meg. A fenti módon kapott difluorozott termék dezacetilezésével N-acetil-2,3-difluor-neuraminsav-észtert, majd ennek hidrolízisével N-acetil-2,3-difluor-neuraminsavat kapunk. Ugyanígy a fenti monofluorozott termék dezacetilezésével N-acetil-3-fluor-neuraminsav-észtert, majd ennek hidrolízisével N-acetil-3-fluor-neuraminsavat kapunk. A találmány értelmében kiinduló anyagként alkil-5-acetamido-2,6-anhidro-4,7,8,9-tetra-0-acetil-2,3,5- -tridezoxi-D-glicero-D-galakto-2-enoátot használunk, és ezt fluorral vagy acetil-hipofluorittal reagáltatjuk, így az új N-acetil-3-fluor-neuraminsav-származékokat kapjuk, amelybe a fluoratomot sztereoszelektíven, rövid idő alatt jó kitermeléssel visszük be. A kapott tennék nem csak az élő szervezetben jelenlevő sziálsav hatásmechanizmusának tisztázására használható, hanem vírusellenes szerként, fogamzásgátlóként és immunadjuvátorként is. A találmány szerinti eljárást a következő példákkal szemléltetjük a korlátozás szándéka nélkül. 1. példa 2,3 g (4,8 mmól) (Ha) képletű metil-5-acetamido-2,6-anhidro- 4,7,8,9-tetra-0-acetil-2,3,5-tridezoxi-D-glicero-D-galakto-2-enoát 25 ml ecetsavval készült 7 °C-os oldatába 2 óra hosszat 1,7 % (6,1 mmól) fluort tartalmazó argongázt vezetünk, ezután az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk, így 2,5 g szirupszerű terméket kapunk, amelyet szilikagél oszlopon (Merck Co., „G 60”, 250 g) kromatografálunk, eluálószerként etil-acetát és éter 3:1 térfogatarányú elegyét használjuk, majd diklór-metán és izopropil-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 1
