200465. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált alfa-aminosavak, származékaik és e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 200465 B 2 14. példa (+)-a-Amino-3-[5-(dietoxi-foszfmil)-metil-(l J’-bifenil)-3-il]-propánsav-etil-észter előállítása 29,9 g (±)-a-amino-3-[5-(dietoxi-foszfinil)-metil-(l,r-biferűl)-3-il]-propánsav-etil-észter éteres oldatát és 27,6 g (+)-di(0,0’-p-toluoil)-D-borkósav éteres oldatát összekeverjük, majd a csapadék alakjában kivált nyers sót leszűrjük, és etanol és terc.-butil-metil-éter 1:4 arányú elegyéből átkristályosítjuk. Az így kapott kristályos terméket háromszor átkrisályosítjuk izopropanol és terc.-buril-metil-éter 1:8 arányú elegyéből. így tiszta (+)-a-amino-3-[5-(dietoxi-foszfinil)-metil-(1,1 ’-bifenil)-3-il]-propánsav-etil-észter (+)-di(0,0’ -p-toluoil-D-tartarátot kapunk, op.: 155-158 °C, [<x]d*° + 88,6° (c=l, etanol és 1 n sósav 2 : 1 arányú elegyében). A fentiek szerint kapott sót telített vizes kálium-hidrogén-karbonát oldattal kezeljük, és diklór-metánnal extraháljuk. így olajszerű formában (+)-a-amino-3-[5-(dietoxi-foszfinil)-metil-(l,r-bifenil)-3-il]-propánsav-etil-észtert kapunk, amelynek hidrokloridja etanol és dietil-éter elegyéből végzett átkristályosítás útán 150-152 °C-on olvad (bomlás közben), [cx]d18 * 20 + 17,7° (c=l, In sósavban). 15. példa (+)-a-Amino-3-[5-(foszfono-metil)-(1,1 ’ -bifenil)- 3-ilJ-propánsav-etil-észter előállítása Kiinduló anyagként a 14. példában kapott vegyületet alkalmazva és a 6. példa szerint eljárva a cím szerinti vegyületet, op.: 280-285 °C (bomlás közben), [oc]d20 + 5,0° (c=l, 1 n sósavban); [a]36520 + 31,0° (c=I, 1 n sósavban). 16. példa (+)-a-Amino-3-[5-(foszfono-metil)-( 1,1'-bifenil)-3-il]-propánsav előállítása A 15. példában kapott terméket 1 n sósavoldattal 60 °C-on 2 órán át melegítjük, majd szárazra pároljuk. A maradékot tetrahidrofurán és víz keverékében oldjuk, és propilén-oxiddal kezeljük. így a cím szerinti vegyülethez jutunk, op.: 275-278 °C (bomlás közben), [a]D20 0,0 ± 0,5° (c=l, 6 n sósavban); [a]36520 + 21,3° (c=l, 6 n sósavban). 17. példa (-)-<X-Amino-3-[5-(dietoxi-foszfinil)-metil-(l ,1’-bifenil)-3-il]-propánsav-etil-észter előállítása A 14. példában leírt eljárást követjük, kiinduló anyagként (±)-a-amino-3-[5-(dietoxi-foszfinil)-metil-(l,r-bifenil)-3-il]-propánsav-etil-észtert és (-)di (0,0’-p-toluoil)-L-borkősavat alkalmazunk. A cím szerinti vegyület hidrokloridja 150-152 °C-on olvad (bomlás közben). [oc]d20 - 17,3° (c=l, 2 n sósavban). 18. példa (-)-a-Amino-3-[5-(foszfono-nietil)-(l ,1’-bifenil)-3- -il]-propánsav-etil-észter előállítása A 6. példában leírt eljárást követjük, kiinduló anyagként a 17. példában előállított terméket alkalmazzuk. így a cím szerinti vegyülethez jutunk, op.: 277-282 °C (bomlás közben), [cx]d20 - 4,4° (c= 1,1 n sósavban); [a]36520 - 28,1° (c=l,l n sósavban). 19. példa (-)-a-Amino-3-[5-(foszfono-metiI)-( 1,1'-bifenil)-3-il]-propánsav előállítása A 16. példában leírt eljárást követjük, kiinduló anyagként a 18. példában előállított terméket alkalmazzuk. így a cím szerinti vegyülethez jutunk, op.: 274-276 °C (bomlás közben), [<x]d20 0,0 ± 0,5’ (c=l, 6 n sósavban); [a]36520 — 20,3' (c=l, 6 n sósavban). A találmány szerinti vegyületek farmakológiai szempontból hatásosak, s így gyógyszerként például terápiás célra való alkalmazásuk indokolt. Közelebbről a találmány szerinti vegyületek a központi idegrendszerre fejtik ki hatásukat, s ez standard vizsgálati módszerekkel igazolható. E vegyületek például gátolják egerek helyváltoztató készségét. Minden vizsgálati csoportba 3 hím egeret osztottunk (18-24 g testsúlyú, OF-1 törzsű állatok, Sandoz Bázel). E csoportokban minden egyes állatnak intraperitoneálisan 3,2, 10, 32, 100, illetve 320 mg vizsgálati vegyületet adtunk. Az adagolás után 1 órával az egereket külön-külön megfigyeltük, és helyváltoztatási készségüket összehasonlítottuk olyan kontroliegerekével, amelyeket csak vivőanyaggal kezeltünk. A hely változtatási készséget a következőképpen minősítettük: változatlan; határozottan több vagy kevesebb, mint a kontrolioké; lényegesen több vagy kevesebb, mint a kontorolloké; teljesen gátolt. A találmány szerinti vegyületek továbbá görcsgátló (antikonvulzív) hatást fejtenek ki, ami szintén standard vizsgálati módszerekkel bizonyítható. Az első vizsgálati módszer alapján a találmány szerinti vegyületek gátolják az egereken elektrosokkal kiváltott görcsöket [módszer: E. Swinyard: J. Am. Pharm. Assoc. Scient. Ed. 38, 201 (1949); J. Pharmacol. Exptl. Therap. 106, 319 (1952)]. E vizsgálati módszer értelmében 3 egérből álló vizsgálati csoportnak (18-26 g testsúlyú, OF-1 törzsű állatok, Sandoz, Bázel) a vizsgálati anyagot intaperitoneálisan 3,2 mg/kg-tól 100 mg/kg-ig terjedő adagokban adagoltuk. Az adagolás után 60 perccel 200 msec, ideig tartó, 50 mA erősségű áramot vezettünk az állatokba a szaruhártyájukra helyezett, elektrolit-zselével bekent elektródokon át. Ez a küszöbb feletti sokk tónusos, nyújtott, görcsös állapotot idézett elő az állatok valamennyi végtagján. Védőhatásnak tekintettük a hátsó végtag görcsös kinyújtásának a gátlását. Tóbb dózisszint vizsgálata után megállapítottuk a legkisebb hatásos dózis (EDmin) értékét. Egy további vizsgálati módszer alapján a találmány szerinti vegyületek gátolják egereken az N-metil-D-aszparaginsav (NMDA) által kiváltott görcsöket. Minden vizsgálati csoportba 6 nőstény egeret osztottunk (18-26 g testsúlyú, OF-1 törzsű állatok, Sandoz, Bázel), és az állatokat 0,1 mg/kg-tól 100 mg/kg-ig terjedő mennyiségben intraperitoneálisan előkezeltük a vizsgálati anyaggal. 30 perccel később az állatoknak szubkután úton, a nyaki tájon 400 mg/kg NMDA-t adagoltunk, s utána az állatokat 30 percig megfigyeltük. Feljegyeztük a görcsök első jeleinek időpontját, az első tónusos görcsök időpontját és a halál beálltának időpontját. A különbségek szignifikanciáját Mann-Whitney-féle U-próbával állapítottuk meg (S. Siegel: Nonparametric Statistics, Kiadó: McGraw-Hill, New York, 1956). Több dózisszint alkalmazása után 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
