200423. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a sebgyógyulást gyorsító, IGF-II-t tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
9 HU 200423 B 10 5’ HO-AATTCATGGCTTA’TCGACCGTCTGAAACTCTGTGCGGCGGCGAACTG-OH 3’ ............ Ml üli I II II M 111 I t I i I I M I | MII IMII 3’ ho-gtaccgaatagótggcagActttgagacacgccgccgé:ttgaccaac-32p 5’ Az 5., a 14., a 24., a 22., a 6. és a 4. fragmenst összeolvasztva, majd összeligálva állítjuk elő a Il-es duplexet: 5* 32p_gTTGAcactctgcagttcgttt:gcggcgaccgtg-oh 3’ 3’ HOIIHUHÍII 11111111111 TGTGAGACGTCAAGCAAÁCGCCGCTGGCé CTGGCACCGAA-32P 5’ A 7., a 8., a 9., a 25., a 26. és a 27. fragmenst összeolvasztva, majd összeligálva nyerjük a III-as duplexet: 5’ 32P-GCTTCTACTTCTCTCGTCCGGCTTCTCGTGTTT-OH 3’ I III I I I I I I I I I I I I I I I IJI I I I ! I I I 3’ HO-GATGAAGAGÁGCAGGCCGAAGAGCACAAAGATC-OH 5’ Az I-es, Il-es és III-as DNS-duplexeket ezután összekeverjük, és T4 DNS ligáz enzimmel kezelve egy, az egyik végén EcoRI, a másik végén pedig Xb&I ragadósvégű, kettósszálú molekulát állítunk elő. Az I, II és III duplex ligálásából származó reakciótermék lOX-os poliakril-amid gélen tisztítjuk: a termék az IGF-II kódoló régiójának mintegy a felét tartalmazza. Az IGF-II kódoló régiójának fennmaradó részét hasonló módon állítjuk eló. Azaz, a 10., 11., 12., 28., 29. és a 30. fragmenst öszszeolvasztva, majd ligáivá előállítjuk a IV-es duplexet: 5’ HO-CTAGACGTTCTCGTGGCATCGTTGAAGAATG-OH 3’ 11 m i h 111111111M i n 11 i i ii 3’ HO-TGCAAGAGCACCGTAGCAACTTCTTACGACGAA-MP 5’ A 23., a 13., a 15., a 16., a 31., a 32., a 33. és a 34. fragmenst összeolvasztva, majd összeligálva előállítjuk az V-ös duplexet: 5> 32P-GCTACTCCTGCTAAATCTGAATAATAG-OH 3’ 11111111111111111111111 3' HO-GGACGATTTAGACTTATTATCCTAG-OH 5' A 17., a 18., a 35. és a 36. fragmenst összeolvasztva és összeligálva nyerjük a VI-os duplexet: 5> Mp-CTGCTTCCGCTCTTGCGACCTGGCTCTGCTGGAAACTTACTGC-OH 3’ 1 1 1 I I II I i | | || I | I | | | || | |,| | || |l | | | | M | | | | OH-GGCGAGAACGCTGGACCGAGACGACCTTTGAATGACGCGATGA-32? 5’3’
