200180. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirazolo-piridin-származékok előállítására
HU 200180 B után a légcsőbe mesterséges lélegeztetéshez alkalmas csövet vezetünk be. A combi vénába katétereket helyezünk a vizsgált vegyület adagolása céljából. A bal vese artéria rövid szegmensét csípőbemetszéssel szabaddá tesszük és a tapadó szövettől megtisztítjuk, hogy az elektromágneses áramlásmérőt megfelelően elhelyezhessük. A vese véráramot mérjük az áramlásmérő fej megfelelő mérőberendezéshez való kapcsolásával (II) tesztvizsgálatnak alávetett vegyület Azonos az 1. tesztvizsgálati anyaggal. (ül) Tesztvizsgálat eredménye Dózis Vese véráram (mg/kg) növekedés % 15 0,1 +19,7 (I) Tfcsztvizsgálati módszer Hím, JCL:SD törzshöz tartozó, 6 hetes és 170-206 g tömegű patkányokat alkalmazunk 18 óra éheztetés után. Közvetlenül a vizsgált hatóanyag orális beadagolása után — amelyet 0,5%-os metíl-cellulózban (0„5%MC) szuszpendálva adagolunk, az állatoknak orálisan 20 ml/kg fiziológiás sóoldatot adunk. A patkányokat hármasával metabolit kamrában tartjuk és a vizeletet 3 óráig gyűjtjük. A vizelet mennyiségét térfogatmérő hengerrel mérjük; valamint meghatározzuk a vizelet hügysav tartalmát Determiner UA készült (Kyowa Medex Co., Ltd.) segítségével. A tesztvizsgálatot 3 csoport állattal végezzük, amelyek mindegyike 3-3 állatot tartalmaz. (Q) Tesztvizsgáimnak alávetett vegyület Az 1. tesztvizsgálat vegyülete. (ül) Tesztvizsgálat eredménye Vizelet és húgysav kiválasztás (kontroll=100%) Dózis Vizelet Húgysav (mg/kg) kiválasztás kiválasztás (%) (%) 10 344 125 A hald« (I) Tesztvizsgálati módszer 11 hetes, Wistar hím patkányokból érzéstelenítés mellett az egyik vesét eltávolítjuk. Kétszer egy héten földimogyoró olajban szuszpendált dezoxikortikoszteron acetátot injektálunk szubkután módon, 30 mg/kg dózisban az állatoknak és ivóvizüket 1%-os sóoldatra cseréljük. A 2-2^6x10’ Pa átlagos vémyomásd állatokat alkalmaztuk a kísérletben 5-13 héttel az operáció után. A tesztvizsgálatnak alávetett anyagot (10 mg/kg dózisban) 5 napig orálisan adagoltuk a DOCA által magas vémyomású állatoknak. A combi artéria vérnyomását mérjük nyomás átalakító segítségével és az átlagos vérnyomás integrált elektromos jelét regisztráljuk. (II) Tesztvizsgálatnak alávetett vegyület Az 1. tesztvizsgálat vegyülete. (Ifi) Ibsztvizsgálat eredménye A vérnyomás maximális csittkenése (%) 27. 5. Tesztvizsgálat Vérlemez aggregációt inhibiáló hatás (I) tesztvizsgálati módszer 2,5-3,0 kg tömegű fehér, japán nyulak szívartériájából vért veszünk és 1/10 térfogat 3,8%-os nátriumcitráttal elegyítjük. Egy vérlemezben gazdag plazmát (RFR) készítünk az elegy 15percig 150xg erővel történő centrifugálásával. A vérlemez aggregációt egy aggregométerrel (Nikohkizai, NKK HEMA TRACER, Model PAT-4A) mérjük. 0,24 ml RPR-t, amely 6,5-7,5xl08 vérlemezt tartalmaz majd 5 ml tesztvizsgálati oldatot vagy PEG2OO:EtOH:H20 (1:1:2) oldatot adunk a küvettába. Az elegyet 2 percig 37 *-on keverjük, majd 5 ml 125 mikro gAnlkoncentrációjúkollagént adunk hozzá, hogy az aggregációt indukáljuk. A tesztvizsgálatot három különböző nyálból nyert RFR-rel végezzük el. (II) Tesztvizsgálatnak alávetett anyag Az 1. tesztvizsgálat anyaga. (Ifi) Tesztvizsgálati eredmények Vérlemez aggregáció inhibiálási aktivitás IC50 érték= 7,9xl0'6 (g/ml) 6. Tesztvizsgálat Szívműködést segítő hatás (I) Tesztvizsgálati módszer 500-600 tömegű, hím Hartley tengerimalacokat kivéreztetéssel megölünk és a szivet kioperáljuk. Egy pitvar csíkot eltávolítunk és szerv-fürdőben szuszpendáljuk, amely 50 ml lyrode oldatot tartalmaz. A szerv-fürdőt 30 '-on tartjuk és 95% 02-5% CO2 elegyet buborékoltatunk át rajta. A pitvar csíkot feszültségmérőhöz kötjük kezdeti 0,4-0,6 g feszültség mellett. Miután konstans mozgékonyságot érünk el a fürdőhöz adjuk a vizsgált hatóanyagot és 30 percig megfigyeljük az összehúzódási erőre és az ütési sebességre kifejtett hatást A hatás értékét a dózis adagolás előtti érték százalékában fejezzük ki. 3 külön preparátumot alkalmazunk minden egyes koncentráció esetében. (II) Tesztvizsgálatnak alávetett vegyület Az 1. tesztvizsgálat anyaga. (Ifi) Tesztvizsgálat eredménye Vizsgált összehúzó Szív ütési vegyület erő nőve- sebesség koncmitkedés % > növekedés rációja (g/ml) % 10“6 10,0 -10,7 7. Tesztvizsgálat Magas vérnyomás p.l lenes hatás (I) Tesztvizsgálati módszer 11 hetes, Wistar hím patkányokból érzéstelenítés mellett az egyik vesét eltávolítjuk. Kétszer egy héten földimogyoró olajban szuszpendált deoxikortikoszteron acetátot (DOCA) injektálunk szubkután módn, 30 mg/kg dózisban az állatoknak és ivóvizüket 1%os sóoldatra cseréljük. 2-2,66x10* Pa átlagos vérnyomásé állatokat alkalmazunk a kísérletben 5-13 héttel az operáció után. A tesztvizsgálatnak alávetett anyagot (3,2 mg/kg dózisban) 5 napig orálisan adagoljuk a DOCA által magas vérnyomásé állatoknak. A combi artéria vérnyomását nyomás átalakító segítségével mérjük és az átlagos vérnyomás integrált elektromos jelét regisztráljuk. 16 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
