200093. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorellemes gyógyászati készítmények előállítására
37HU 200093 B 38 a 9. vagy 5. vagy 2. napon ill. három alkalommal a 9., 5. és 2. napokon adtuk a CDM-et 25 ug/kg dózisban i.v. Eredmény: A 9. és 5. napon előkezelésben részesült állatok élettartama a kontroll kezeletlen állatokéhoz képest átlagosan 4- -szeresére növekedett, valamint a tumorraentes állatok száma szignifikánsan növekedett. II.) A CDM immunmoduláns hatásai, melyek közvetett módon hozzájárulhatnak a CDM daganatellenes hatásához: In vivo vizsgálatok: 1.) Antitoxinogén antigén (tetanusz toxoid) immuneffektusának modulálása CDM-mel Módszer: Tetanusz toxoid antigént adszorbeáltunk fém-kolloid anyagra, majd kellő számú egércsoportot kialakítva az antigénből 2-es alapú logaritmusú higitás-sorozatot készitve, immunizáltuk a kísérleti állatcsoportokat ( tesztcsoportok). Egyidejűleg .nemzetközi vagy nemzeti standard ' preparátummal is elvégeztük az immunizálást ( kontrollcsoport). A CDM alkalmazása: a. ) Dózis: 25-50-100-200 ug/kg. b. ) Az alkalmazás időpontja: az immunizálás időpontjához (0 pont) viszonyítva a -3., 0., +3., +6., +18. napokon egyszeri kezelésként, ill. -3., 0., vagy -3., +3., vagy 0., +3., vagy 0., +18., vagy +6., + 18. napokon két alkalommal adtuk a CDM különböző dózisait. A CDM kezelés 500 jug/kg dózisú CDM intraperitoneális adagolásával történt egy hétig, naponta. A kontroliegerek a CDM-mel azonos mennyiségű fiziológiás sóoldatot kaptak. A kísérlet során CDM-kezelt és -kezeletlen (kontroll) egerek intraperitoneumából kimosott makrofágok fagocitózisát vizsgáltuk. Makrofágok nyerése Az intraperitoneumból MEM-H 870807/1 tápfolyadékkal kimosott sejteket 10 percig 1000 fordulatszámon centrifugáljuk, majd tápfolyadékkal 7xl06/ml sejtszámot állítunk be. Eredmény A kísérleti állatokból nyert peritoneális makrofágok fagocitáló képessége (NBT redukcióval vizsgálva) a CDM előkezelés hatására (6 napig 500 jug/kg/nap) jelentősen fokozódott. A fagocitózis mértékét jellemző extinkciós érték az előkezelt állatok esetében a kontrollokhoz képest szignifikánsan (több mint kétszeresére) növekedett. In vitro vizsgálat A CDM humán mononukleáris sejtek mitogén indukált sejtosztódásra kifejtett hatása Alkalmazott sejtek: Egészséges emberek kristályos heparinnal (100 jug/ml vér) alvadásgátolt vénás véréből Boyum módszere szerint [Scand. J. Clin. Lab. Invest., 21, 97. (1968)] Ficoll- -Uromiro gradiensen elkülönített mononukleáris sejtjein végeztük. Vizsgálati módszer: A CDM sejtosztódásra gyakorolt hatását mitogén stimulációval timidin beépülés alapján vizsgáltuk, 96 lyukú, U-fenekű szövettenyésztő tálcákon, 100 pl-es végtérfogatokban, 2-4 párhuzamos tenyészettel. Möller, G. és munkatársai, Transplant. Rev., 11, 3. (1972), Waldmann, T. A. és munkatársa, Adv. Immunol., 32, 1. (1983), Onody, C. és munkatársai, Thymus, 1, 205 (1980), Görög, Gy. és munkatársai, Cell, Immunol., 96, 184. (1985). A drogkezelés nélküli kontrolltenyészetek párhuzamosainak száma ötszöröse volt az egyes drogkoncentrációkkal képzett tenyészetekének, hogy a kontroll szórástartományát kísérletenként is meg tudjuk határozni.- A fentiekben leirt vizsgálatokban az inkubáció minden esetben 37 °C-on, 5% COz-tartalmú páratelt levegőben történt. Az inkubációs idő letelte után valamennyi tenyészethez 1 uCi 3H-timidint adtunk, majd további 6 óra inkubáció után a tenyészeteket szüretelőkéssülékkel megfelelő szűrőpapírra szívtuk, szárítottuk, és a beépült timidinre jellemző cpm értéket folyadék-szcintillációs módszerrel 6-számlálón mértük. Alkalmazott mitogének Fitohemagglutinin (PHA; Wellcome), Con- cavalin-A (Con-A, Calbiochem) és Poke Weed Mitogen (PWM, Gibco). Azonos sejtek timidin- -beépülését vizsgáltuk 3, illetve 5 napos tenyésztési idő után.- Valamennyi vizsgálatnál a sejtek és a drog összemérését közvetlenül követte a mitogén stimuláció. -10 15 20 25 30 35 40 4 o 50 00 60 65 21
