200093. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorellemes gyógyászati készítmények előállítására

36

csökkenés a 16 umol/1 koncentrációnál és a 48 órás inkubációs időnél észlelhető.

A hatás jelentősége:

A sejtmembrán sziálsav-tartalmának csökkenése következtében a tumorsejtek felszíni antigénjei kifejezettebbé válnak, amelynek következtében immunogenicitésuk fokozódik. Részben ezen hatása alapján magyarázható az a kísérleti eredményünk, amelynek során kimutattuk, hogy az Ehrlich turaorsejtek konkomittáló immunitása fokozódott (lásd imm. fejezet). Továbbá az irodalmi adatok szerint (Edelman G. M. Science 219, 450- -457. (1983).

A sziálsav-tartalom csökkenése a differenciálódást segiti elő. (lásd differenciálódás fejezet).

35 HU

A CDM KÖZVETETT TUMORELLENES IMMUNOLÓGIAI HATÁSA

I.) A CDM daganat megeredését gátló immunmoduláns hatásának állatkísérletes bizonyítása:

(A DCM-et előkezelés formájában alkalmaztuk).

1.) Winn Assay:

Módszer:

Tumorvonal: Ehrlich tumorsejteket (EAT) intraperitoneális transzplantációval tartottuk fenn 5xlQ6 sejt/egér koncentrációban oltva. A kísérletek során a turaorsejteket lxlO7 sejtszámmal szubkután oltottuk.

CDM kezelés: 25 ill. 50 ug/kg CDM-mel előkezeltük a CFLP egereket 8, 6, 5 és 2 nappal a transzplantáció előtt.

Lépsejt izolálás: A lép tokjának felmetszése után a lépsejteket RPMI oldat segítségével kinyertük, viabilitásukat lX-os trypan-kék oldattal határoztuk meg.

A Winassay kivitelezése: Az előkezelt, ill. kontrollállatokból nyert lépsejteket EAT-sejtekkel 37 °C-os CO2 atmoszférájú termosztátban 30 percig inkubáltuk RPMI tápoldatban, az effektor/target arány 7:1 ill. 10:1 volt. Az inkubációt követően a sejteket szubkután oltottuk az állatokba.

Eredmény: A CDM-mel előkezelt egerek lépsejtjeinek tumoricid aktivitása a kontroliegerek lépsejtjeihez képest szignifikánsan megnőtt. Különösen kifejezett tumorgátlást észleltünk az 50 ug/kg dózisú CDM előkezelés esetében.

Havelar, J. J. és munkatársai, Oncology, 42, 179-186. (1985).

Lafreniete Z. és munkatársa, Cancer Res. 45, 3785-3741. (1985).

Planga R. Int. J. Immunotherapy, 11, 19-21, (1986).

2.) Konkomittáló immunitás:

Tumorvonal: Ehrlich tumorsejteket (EAT) intraperitoneális transzplantációval tartottuk 5 fenn 5x10* sejt/egér koncentrációban oltva. A kísérletek során a tumorsejteket 2xl07 sejtszámmal szubkután oltottuk.

A vizsgálat kivitelezése: az EAT sejteket 2xl07 sejtszámmal szubkután transzplantáltuk 10 az állatok jobb oldalára, majd ezt követően a 6. illetve 7. napon az állatok bal oldalára szubkután transzplantáltunk azonos számú EAT sejteket. A kísérlet során mértük az első és második tumor térfogatát az idő függ- 15 vényében.

CDM kezelés: a második tumoroltást követő első napon kezdtük a CDM kezelést, melyet háromnaponként adtunk 50 ill. 500 ug/kg dózisban szubkután.

20 Eredmény: A CDM kezelésben nem részesülő kontrollállatokhoz képest a második tumor növekedése az 50 ug/kg dózisú CDM kezelés esetében csak kismértékben (nem szignifikánsan) gátlódott, mig az 500 ug/kg dó- 25 zisban történt CDM kezelés hatására jelentős mértékű (szignifikáns) gátlás volt észlelhető a második tumor kifejlödési idejében és méretében.

Gorelik, E. és munkatársai, Int. J. Cancer, 30 21, 617-625. (1978),

Tofaletti, D. L. és munkatársai, J. Immunoi., 130, 2982-2986. (1983),

Gorelik, E. és munkatársai, Int. J. Cancer, 27, 847-856. (1981).

35

3,1 A CDM előkezelés hatása az Ehrlich és Walker típusú ascites tumorok

megeredésére:

40 a.) Ehrlich ascites tumor (EAT):

Tumorvonal: EAT sejteket intraperitoneális transzplantációval tartottuk fenn 5x10® sejt/egér koncentrációban oltva. A kísérletek 45 során a tumorsejteket különböző sejtszámmal (5.105—1.107) intraperitoneálisan oltottuk.

CDM előkezelés: a tumormentes állatoknak a tumoroltást megelőzően egy alkalommal a 9. vagy 5. vagy 2. napon adtuk a CDM-et 50 25 ug/kg dózisban i.v.

Eredmény: A 9. és 5. napon előkezelésben részesült állatok élettartama a kontroll kezeletlen állatokéhoz képest átlagosan 5- szörösére növekedett, valamint a tumormen- 55 tes állatok száma nem szignifikánsan növekedett.

b.) Walker típusú ascites tumor;

60 Tumorvonal:

Wistar patkányokban intraperitoneális transzplantációval tartottuk fenn a Walker tumort lxlO7 sejt/patkány koncentrációban oltva.

CDM előkezelés: a tumormentes állatok- 65 nak a tumoroltást megelőzően egy alkalommal

200093 B

20