199881. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vazopresszin antagonista hatású új bázikus peptidek előállítására

1

HU 199881 B

2

kötődését vazopressztin felesleg (7,5.10"* m61/l) jelenlétében és anélkül. Ezek az értékek a nemspecifikus, illetve a teljes kötődést képviselik. Valamely vegyület Kg értéke a kompetitiv inhibicióra vonatkozó egyenletből adódik: Kg =

IC5o/(l + L/Kd), ahol IC50 a 3H-vazopresszin 50%-os gátlásához szükséges koncentráció (Kd= 3.6.10'9 mól/1); 1 SD= 0.4.10-9 mól/l). K Kp értéket sertésvese-membrán készítményen határoztuk meg és 3 mérés átlagértékét adjuk 10 meg. Az egyes vizsgált vegyületekre vonatkozó Kg értéket az 1. táblázatban adjuk meg.

Az au ti-AD H aktivitás in vivo vizsgálatát vízhiányos patkányokon végeztük. A vizsgálati eljárást a következőkben részletesen ismertetjük. 15

Hím patkányoktól a vizsgálatot megelőzően körülbelül 18 órával megvonjuk a tálálékot és a vizet. Az állatokat négyesével anyagcserevizsgálatra alkalmas ketrecbe helyezzük. O időpontban intraperitoneálisan beadjuk a vizsgálandó vegyü- 20 letet a kísérleti csoportnak és azonos térfogatú hordozóanyagot adunk mind az éheztetett, mind a nem éheztetett kontroll csoportnak. Minden 4. órában mérjük a vizelet térfogatát és ozmotikus nyomását. A vizsgálati eredményeket a kiválasz- 25 tott vizelet összesített térfogata, a mEq kiválasztott elektrolit/patkány, a mg kiválasztott karbamid/patkány és a m Osm/kg H20 ozmotikus nyomás adatok feljegyzésével rögzítjük. A tűrésvizsgálatot alkalmazzuk a szignifikancia mégha 30

tározására. Meghatározzuk az ED300 értéket, amely a vizsgált vegyületnek azt a jig/kg értékben megadott dózisát jelenti, amely a vizelet ozmotikus nyomásának 300 mOsm/kg értékre való 5 csökkentéséhez szükséges.

Az 1. táblázatban szereplő megjelölések a következő vegyületeket jelentik:

A [l-(//?-Merkapto-,0,/?-ciklopentametilén/-propionsav)-2-D-tirozin-4-valin-8-(l,5-diaminopentán)-8-dezarginin-9-dezglicinamid]-vazopresszin,

B [ 1 - (//?-Mer kapto-/3,/?-ciklopentametilén/--propionsav)-2-(0-etil-D-tirozin)-4-valin-8-(l,5- -diamino-pentán)-8-dezarginin-9-dezglicinamid]-vazopresszin,

C [1- (//?- Merkapto- /3,/í-ciklopentametilén/-propionsav)-2-(0-etil-D-tirozin)-4-valin-8-(l,5- -diamino-bután)-8-dezarginin-9-dezglicinamid]-vazopresszin,

D [l-(//?-Merkapto-/3,/?-ciklopentametilén/-propionsav)-2-(0-etil-D-tirozin)-4-valin-8-dezarginin-9-dezglicinamid]-vazopresszin,

E [l-(//5-Merkapto-/J,/?-ciklopentametilén/-propionsav)-2-D-tirozin-4-valin-8-dezarginin-9- -dezglicinamidj-vazopresszin,

F [ 1- (Iß- Merkapto-/?,/?-ciklopentamet ilén/--propionsav)-2-(0-etil-D-tirozin)-4-valin-7-dezarginin-9-dezglicinamid-7-(l,5-diamino-pentán)]-vazopresszin,

G [l-(//3-Merkapto-/3,/?-ciklopentametilény-propionsav)-2-(0-etil-D-tirozin)-4-valin-8-dezarginin-9-dezglicinamid-8-(l,4-amino-guanidinobután)]-vazopresszin.

1. táblázat

Vegyület

Patkány

ED300 (/xg/kg)

Sertés

Kb(M) +

Ki(M) + +

Ember Ki(M)+ +

A

957

2,2xl0"7

1,1x10'®

B

27

2,9x10®

7,2xl0"9

—

C

19

9,2xl0"9

6,4xl0"9

7,5xl0”9

D

>182

4,lxl0'7

l,3xl0"7

—

E

>6000

1,7x10 s

1,8x10-*

—

F

94,5

1,9x10-®

6,8xl0'9

6,6xl0"9

G

22

1,4x10-®

6,0xl0"9

3,5xl0‘9

+ kötődési konstans (Id. a 11. és 12. oldalon)

+ + gátlási konstans (Id. a 11. oldalon)

A következő példákban a találmány szerinti eljárást részletesebben ismertetjük. A hőmérsékletet mindenütt °C-ban adjuk meg.

Az előállított vegyületek tisztaságát nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással ellenőrizzük. Az erre vonatkozó adatok között szereplő K’ egy konstans, amely az eljárásban alkalmazott oszlopra és a vizsgált vegyületre jellemző.

50

Meghatározása a K’= (RTj - RT0)/(RT0) képlet alapján történik, ahol RTj jelentése az abszorbeált minta retenciós ideje, RT0 az oszlopon nem adszorbeálódó minta retenciós ideje. Ez a 55 konstans kizárólag az oszlop típusától és az eluensként alkalmazott oldószertől függ, az oszlop méretétől és az áramlási sebességtől független.

60

4