199879. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hexapeptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199879 B 2 zes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. így 4,45 g Z•Trp-Tle-Leu-OBu‘-t kapunk. VRK, Rf * 0,30 (metanol/kloroform 1:10). (ot 1d “ — 42,0° (c = 0,76, metanol). Elemanalízis a C35H48N4C>6 x 0,5H2O öszszegképlet alapján: számított: C: 66,75, H: 7,84, N: 8,90%, talált: C: 66,99, H: 7,65, N: 8,87%. 3) Z-Pro-Trp-Tle-Leu-OBui előállítása 418 mg Z-Pro-OH-t 10 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd -20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 0,784 ml N-metil-morfolint és 0,160 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 770 mg H-Trp-Tle-Leu-OBu' (előállítás: Z-Trp-Tle-Leu-OBu' Pd/C jelenlétében végzett katalitikus redukciójával) 5 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül — 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. így 1,1 g Z-Pro-Trp-Tle-Leu-OBu'-t kapunk por alakban. VRK, Rf = 0,69 (metanol/kloroform 1:6). [“Id ” ~ 88,7° (c = 0,63, diklór-metán). Elemanalízis a Q0H55N5O7 x 0,3H2O összegképlet alapján: számított: C: 66,42, H: 7,75, N: 9,68%, talált: C: 66,36, H: 7,61, N: 9,65%. 4) Z-Arg(Tos)-Pro-Trp-Tle-Leu-OBuÍ előállítása 3,6 g H-Pro-Trp-Tle-Leu-OBu*-t (előállítás: Z-Pro-Trp-Tle-Leu-OBu* Pd/C jelenlétében végzett katalitikus redukciójával) és 2,85 g Z-Arg(Tos)-OH-t 50 ml tetrahidrofuránban oldunk és 5 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 1,25 g N-hidroxi-benzotriazolt és 1,4 g diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet egy éjszakán keresztül 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így 3,46 g Z-Arg(Tos)-Pro-Trp-Tle-Leu-OBu‘-t kapunk. VRK, Rf = 0,25 (metanol/kloroform 1:8). [o]d= — 41,9° (c= 0,67, diklór-metán). Elemanalízis a C53H73N0O10S x 1,5H20 öszszegképlet alapján: számított: C: 60,32, H: 7,26, N: 11,95%, talált: C: 60,57, H: 7,12, N: 12,08%. 5) Boe-D-Lvs(Cl-Z)-Arg(Tos)-Pro-Trp-Tle-Leu-OBui előállítása 1,63 g Boc-D-Lys(Cl-Z)-OH-TBA-t víz és etil-acetát elegyében oldunk 3,4 ml In H2S04 jelenlétében. Az etil-acetátos fázist vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A kapott olajat 30 ml tetrahidrofuránban oldjuk, majd — 20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 0,368 ml N-metil-morfolint és 0,319 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 2,99 H-Arg(Tos)-Pro-T rp-Tle-Leu-OBu* (előállítás: Z-Arg(Tos)-Pro-Trp-Tle-Leu-OBu* Pd/C jelenlétében vég zett katalitikus redukciójával) 10 ml tetrahidro furánban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül — 5 *C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet szárazra párolva 3,7 g Boc-D-Lys(Cl-Z)-Arg(Tos)-Trp-Tle-Leu-OBu‘-t kapunk. VRK, Rf= 0,61 (metanol/kloroform 1:8) [u)d = 51,4° (c= 0,18, diklór-metán). Elemanalízis a C^H^NnO^SCl x 1H20 öszszegképlet alapján: számított: C: 58,72, H: 7,24, N: 11,77%, talált: C: 58,48, H: 7,09, N: 11,52%. 6) H-D-Lys-Arg-Pro-Trp-Tle-Leu-OH előállítása 3,0 g Boc-D-Lys(Cl-Z)-Arg(Tos)-Pro-Trp-Tle-Leu-OBu'-t 1,5 ml anizol jelenlétében —10 °C hőmérsékleten egy hermetikusan zárt HF reaktorban 100 ml hidrogén-fluoridban oldunk. Az oldatot 1 órán keresztül keverjük, majd a hidrogén-fluoridot ledesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk és vízben oldjuk. Az oldatot Amberlite IRA-93 gyantával (ecetsavas forma) kezeljük, majd fagyasztva szárítjuk. A kapott nyersterméket ioncserélővel (CM-Toyopearl, 2,5 x 24,5 cm méretű oszlopon víz/1,4 mmól/liter ammónium-acetát oldat elegyével a gradiens módszer szerint eluálva) tisztítjuk. így 760 mg H-D-Lys-Arg-Pro-Trp-Tle-Leu-OH-t kapunk ecetsavas só formájában. VRK, Rf - 0,43 (butanol/ecctsav/víz 4:1:1) [a Jd“ - 79,2° (c = 1,1% ecetsav) Tömegspektrum analízis (FAB): 840 /(M + H)+/ Aminosav analízis: Pro 1,05(1), Leu 0,95(1), Lys 1,02(1), Trp 0,93(1), Arg 1,05(1). 6. példa H-(Me)Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-QEt előállítása 11 Z-Pro-T rp-Tle-Leu-QEt előállítása 1,11 g Z-Pro-OH-t 15 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd —20 "C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 0,49 ml N-metil-morfolint és 0,43 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 0,21 g H-Trp-Tle-Leu-OEt (előállítás: ZTrp-Tle-Leu-OEt Pd/c jelenlétében végzett katalitikus redukciójával) 10 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül -5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így 30,9 g Z-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t kapunk amorf anyag formájában. VRK, Rf = 0,36 (metanol/kloroform 1:20) HD-41,1‘(c- 1, DMF) Elemanalízis a C38H51N5O7 összegképlet alapján: számított: C: 66,16, H: 7,45, N: 10,15%, talált: C: 65,89, H: 7,46, N: 10,05%. 2) Z-Lvs(Bocl-Pro-Trp-Tle-Lcu-OEt előállítása 1,66 g Z-Lys(Boc)-OH-t 30 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd - 20 °C hőmérsékletre hűt-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
