199879. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hexapeptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199879 B 2 jttk. Hozzáadunk 0,48 ml N-metil-morfolint és 0,42 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd S perc elteltével 2,42 g H-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt (előállítás: Z-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt Pd/C jelenlétében végzett katalitikus redukciójával) 20 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül — 5 ®C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, így 3,03 g Z-Lys(Boc)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t kapunk amorf anyag formájában. VRK, Rf = 0,50 (metanol/diklór-metán 1:10). l«jD= — 39,3® (c = 1, DMF). Elemanalízis a C49H72N7OK) x 0,3H2O öszszegképlet alapján: számított: C: 63,66, H: 7,91, N; 10,60%, talált: C: 63,55, H: 7,83, N: 10,55%. 3) Boc-(Me)Arg(Mtr)-Lyc(Bocl-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt előállítása 1,79 g Boc-(Me)Arg(Mtr)-OH-t (előállítása: H-Arg(Mtr)-OH-ból P.Quitt és munkatársai (Helvetica Chemica Acta, 32, 327/1963/) szerint) 300 ml tetrahidrofuránban oldjuk, majd —20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 0,39 ml N-metil-morfolint és 0,34 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 2,54 g H-Lys(Boc)-Pro-Trp-TIe-Leu-OEt Pd/C (előállítás: Z-Lys(Boc)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt Pd/C jelenlétében végzett katalitikus redukciójával) 20 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül — 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, így 2,73 g Boc-(Me)Arg(Mtr)-Lys(Boc)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t kapunk. VRK, R= 034 [uJD= — 3^,6° (C = 1, DMF) Elemanalízis a C^H^NnO^S x 0,3H2O ószszegképlet alapján: számított: C: 59,35, H: 8,11, N: 12,08%, talált: C: 59,18, H: 7,96, N: 11,96%. 4) H-(Me)Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu OEt előállítása 1,2 g Boc(Me)Arg(Mtr)-Lys(Boc)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t és 1,2 ml anizolt 24 ml trifluorecetsavban oldunk. Az oldatot 4 órán keresztül 30 °C hőmérsékleten keverjük, majd a trifluorecetsavat ledesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk és szűrjük. A nyers peptidet nagynyomású folyadékkromatográfiásán (Nukleosil 5C18, 2,0 x 25 cm) 0,015 tömeg%-os sósavval (víz/CH3CN 84:16) cluálva tisztítjuk, majd fagyasztva szárítjuk. így 350 mg H(Me)Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Lcu-OEt-t kapunk hidroklorid formájában. VRK, Rf = 0,71® (c » 0,8,1% ecetsav) Tömegspektrum analízis (FAB) - 854 /(M + H)+/ Aminosav analízis: Pro 1,07(1), Leu 0,9(1), Trp 0,96(1). 7. példa H-(Me)Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-OH előállítása 2,97 g H(Me)Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu- OEt-t 20 ml víz és 10 ml metanol elegyében oldunk, majd hozzáadunk 9,25 ml 2 n nátrium-hidroxidot. Az elegyet 2 órán keresztül keverjük, majd 1 n sósavval semlegesítjük és bepároljuk. A maradékot nagynyomású folyadékkromatográfiásán (Chemcosorb 5 - ODS - H, 2,0 x 25 cm) 0,015 tömeg% sósavval (víz/CH3CN 90:10) eluálva tisztítjuk. így 2,4 g H(Me)Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-OH-t kapunk hidroklorid formájában. VRK, Rf = 0,39 (butanol/ecetsav/víz 4:1:1) (c*|d= - 74,5° (c = 0,9,1% ecetsav) Tömegspektrum analízis (FAB): 826 /(M + H)+/ Aminosav analízis: Pro 1,13(1), Leu 0,96(1), Trp 0,91(1). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletű hexapeptidek előállítására, a képletben A jelentése L- vagy D-Arg, amely az alfa-nitrogénatomon benzilcsoporttal vagy 1—4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituálva lehet, D-lys, valamint (c) általános képletű omega-amino-alkanoil-csoport, ahol R5 és R6 jelentése hidrogénatom és m értéke 1 — 5, továbbá (d) általános képletű omega-quanidino-alkanoil-csoport, ahol n értéke 1-5, B jelentése L-Arg vagy L-Lys, C jelentése L-Pro, D jelentése L-Trp, E jelentése L-fenil-glicin vagy L-terc-leucin, F jelentése L-Leu, R1 jelentése -OR9 általános képletű csoport, ahol R9 jelentése hidrogénatom vagy 1 — 4 szénatomos alkilcsoport, azzal jellemezve, hogy az ismert védőcsoportokkal védett (I) általános képletű hexapeptid, a képletben A, B, C, D, E, F és R1 jelentése a tárgyi körben megadott, védőcsoportjait eltávolítjuk és kívánt esetben a kapott (1) általános képletű észtert hidrolizáljuk. 2. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely 1. igénypont szerint előállított (1) általános képletű hexapeptidet, a képletben A, B, C, D, E, F és R1 jelentése az 1. igénypontban megadott, gyógyszerészeti célra alkalmas vivőanyaggal és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal keverünk össze és gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
