199879. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hexapeptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199879 B 2 vízzel mossuk és szárazra pároljuk. így 5,34 g Boc-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-OH-t kapunk. VRK, Rf » 0,36 (metanol/diklór-metán 1:10). Elemaoallzis a C37H53N7O10S x 1,5H20 öszszegképlet alapján: számított: C: 54,53, H: 6,93, N: 12,03%, talált: C: 54,80, H: 6,78, N: 12,01%. 6) Boc-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt előállítása 2,76 g Boc-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-OH-t és 1,60 g H-Trp-Tle-Leu-OEt-t (előállítás: Z-Trp-Tle-Leu-OEt Pd/C jelenlétében végzett katalitikus redukciójával) 20 dimetil-formamidban oldunk és 5 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 0,57 g N-hidroxi-benzotriazolt és 0,76 g diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet 3 órán keresztül 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. így 4,1 g Boc-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t kapunk. VRK, Rf = 0,61 (metanol/diklór-metán 1:15). [o]d= — 45,2°(c= 0,45, diklór-metán). Elemanaiízis a C^H^N^O^S x 1,5H20 öszszegképlet alapján: számított: C. 59,31, H: 7,39, N: 12,27%, talált: C: 59,35, H: 7,28, N: 12,59%. 7) Bz-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt előállítása 1,2 g HCl-H-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t (előállítás: BOc-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t anizol jelenlétében trifluor-ecetsawal kezelünk és 10 tömeg% HCl/etil-acetát oldattal hidrokloriddá alakítjuk) 20 ml tetrahidrofuránban oldjuk. Hozzáadunk 0,25 ml N-metil-morfolint és 0,174 g benzoil-kloridot. A reakcióelegyet 5 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így 0,90 g Bz-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t kapunk. VRK, Rf = 0,49 (metanol/diklór-metán 1:15). (a Jd = —39,3° (c= 0,19, diklór-metán). Elemanalízis a C^HgsNuO^S x 4,5H2Ü öszszegképlet alapján: számított: C: 58,52, H: 7,21, N: 11,73%, talált: C: 58,36, H: 6,68, N: 12,15%. 8) Bz-D-Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt előállítása 0,90 g Bz-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t 0,5 ml anizol jelenlétében —10 6C hőmérsékleten egy hermetikusan zárt HF reaktorban 30 ml hidrogén-fluoridban oldunk. Az oldatot 1 órán keresztül keverjük, majd a hidrogén-fluoridot ledesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk és vízben oldjuk. Az oldatot Amberlite 1RA-93C gyantával (ecetsavas forma) kezeljük, majd fagyasztva szárítjuk. A kapott nyersterméket nagynyomású folyadék kromatográfiásan (Nuclcosil 5V18, 2,95 x 25 cm) 0,015 tömeg% sósavval (VÍZ/CH3CN 26:24) eluáiva tisztítjuk. Fagyasztva szárítással 91 mg Bz-D-Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t kapunk hidroklorid só formájában. VRK, Rf = 0,42 (butanol/ecetsav/víz 4:1:5). (“Id = -83,2°(c = 0,75,1% ecetsav). Tömegspektrum analízis (FAB): 944 /(M + H?)/. Aminosav analízis: Pro 0,90(1), Leu 0,94(1), Lys 1,08(1), Trp 0,93(1), Arg 1,16(1). 4. példa Bz-D-Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-OH előállítása 30 mg Bz-D-Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt-t 1 ml vízben oldunk és hozzáadunk 0,24 ml 1 n nátrium-hidroxidot. A kapott elegyet 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd 0,24 ml 1 n sósavval semlegesítjük. Az elegyet nagynyomású folyadékkromatográfiásán (Chemcosorb. 5-ODS —H, 2,0 x 25 cm) 0,015 tömeg% sósavval (víz/CH3CN 70:30) eluáiva tisztítjuk. Fagyasztva szárítással 12 mg Bn-D-Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-OH-t kapunk hidroklorid só formájában. VRK, Rf= 0,36 (n-butanol/ecetsav/víz 4:1:5). (“)d = —76,8° (c= 0,6,1% ecetsav). Tömegspektrum analízis (FAB): 916 /(M + H)+/. Aminosav analízis: Pro 1,03(1), Leu 0,89(1), Lys 1,05( 1), Trp 0,93(1), Arg 1,10(1). 5. példa H-D-Lys-Arg-Pro-Trp-Tle-Leu-OH előállítésa 1) Z-Tle-Leu-QBu- előállítása 3,25 g Z-Tle-OH-t 30 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd -20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 1,34 ml N-melil-morfolint és 1,16 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 2,28 g H-Leu-OBu* 10 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. így 5,3 g Z-Tle-Leu-OBu'-t kapunk. VRK, Rf » 0,54 (metanol/kloroform 1:20). [or]D= -11,6° (c-2,9, diklór-metán). Elemanalízis a x 0,3H2O öszszegképlet alapján: számított: C: 65,52, H: 8,84, N: 6,37%, talált: C: 65,31, H: 8,69, N: 6,22%. 2) Z-Trp-Tle-Leu-QBut előállítása 2,78 g Z-Trp-OH-t 30 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd -20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 0,91 ml N-metil-morfolint és 0,785 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 2,48 g H-Tle-Leu-OBu, (előállítás: Z-Tle-Leu-OBu'lO tömeg% Pd/c jelenlétében végzett katalitikus redukciójával) 10 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül -5 *C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vi5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
