199878. lajstromszámú szabadalom • Eljárás acilezett splenopentinek és a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199878 B 2 nősen a törzssejteken), amelyek radioaktív ligandumok kötési vizsgálatával kimutathatók. Ilyen kötési helyek találhatók a timocitákon is, és *H- jelzett splenopentinnel, vagy 125I-jelzett D-Acil- SPS-tel kimutathatók (5.2. táblázat). — HIV-infekciók terápiájánál (16. példa, 6.1. táblázat és 6.Í ábra). A D-AÜ-SP5 adagolás a HIV-fertőzött pácienseknél elősegíti az összes limfocitaszám növekedését a kontroll területen, valamint a CD3 + -, CD4+- és DR+-sejtek abszolút számának növekedését, valamint a CD4+/CD8+-viszony javulását. 16 hetes terápia után sem léptek fel mellékhatások (6.1. táblázat). Ha kombinációban alkalmazzuk, az AIDS-terápiában használatos citosztatikummal és a revertáz-gátlóval, az azido-timidinnel vagy annak hatékonyabb változatával, a fluor-titnidinnel, akkor gyorsabban normalizálódnak azok az immunrendszerben bekövetkezett hátrányos elváltozások, amelyeket ezek az anyagok okoznak (6.1. ábra). — Immunszupresszív hatás megakadályozása krónikus intoxikáció esetén (17. példa, 7. táblázat). Az Acil-SP5 azáltal hat, hogy megszűnteti az alkohol és egyéb krónikusan ható noxa által kiváltott antigén specifikus humorális immunreakció szupressziót, megszünteti a fagocita-sejtek számának, illetve aktivitásának csökkenését és megakadályozza a timusz és a lép perciális atro fiáját. — Autoimmun reakciók terápiája (18. példa, 8.1 — 8.2 táblázat). A találmány szerint előállított anyagok megfelelnek különböző olyan betegségek terápiájánál, amelyeknél az utoimmun reakció példáján ábrázolva /8.1. táblázat/). Ilyen például a reumatoid artritisz, az SLE és az atopiás reakciók. A sikeres immunizálás után azonban nem segítik elő az antigén-specifikus antikörpertiter hátrányos csökkenését (8.2. táblázat). A következőkben néhány példán keresztül közelebbről is bemutatjuk a találmányt. Kiviteli példák A példákban alkalmazott rövidítések: M: mono-; D: di-; Pal: palmitoil-, Ac: acetil. 1. példa ArginiI-(N--acetil-lizil)-glutamil-valil-tirozin-(N£-MAc-Sp5) előállítása 1.1 Acilezés 1,83 g (2 mmól) Boc-Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OH x 2HOAc-t 5 ml dimetil-formamidban oldunk és hozzáadunk 0,487 g (2,2 mmól) acetil-ONB-t. Egy óra után a reakcióelegyet normál sósavba öntjük, a kicsapódó terméket leszűrjük, vízzel semlegesre mossuk. Metanoi/etil-acetAt keverékéből átkristályosítjuk és Így 1,72 g Boc•Arg-Lys(Ac)-Glu-Val-Tyr-OH x HOAc-t kapunk. Kitermelés: az elméleti 96,3%-a. 1.2 A védőcsoport lehasítása 1,34 g (1,5 mmól) Boc-Arg-Lys(Ac)-Glu-Val-Tyr-OH x HOAc-t 30 percig 10 ml trifluor-ecetsav/diklór-etán 1:1 arányú keverékkel keze-' lünk és a felesleges trifluor-ecetsav ledesztillálása után metanolból éterrel kicsapjuk. Kitermelés: 1,34 g Arg-Lys(Ac)-Glu-Val-Tyr-OH x 2TFA, az elméleti 98,2%-a. Híg sósavból való liofilizálással a megfelelő N£-MAc — SP5 x 2HCl-t kapjuk. Molekulatömeg: 808,75. Összegképlet: C33H55N9O10CI2. Rf= 0,34 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével). A kapott vegyületet 1 n nátrium-hidroxiddal titráljuk, majd az elegyből a sót eltávolítjuk, végül liofilizáljuk a kapott reakcióelegyet. így a szabad peptidet, az N£-monoacetil-SP5-ot kapjuk meg. Molekulatömeg: 735,8. Összegképlet: C33H53N901(). Rf = o,34 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével). 2. példa Arginil-(N--palmitoil-lizil)-glutamil-valil-tirozin-(«-MPal-SP5) előállítása 2.1 Acilezés 1,83 g (2 mmól) Boc-Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OH x 2HOAc-t 5 ml dimetil-formamidban oldunk és hozzáadunk 0,919 g (2,2 mmól) Pál-ONB-t. A reakcióelegy feldolgozása és tisztítása ugyanúgy történik, mint az 1.1. példában. Kitermelés: 2,07 g Boc-Arg-Lys(Pal)-GLu-Val-Tyr-OH x HOAc, az elméleti 94,6%-a. 2.2 A védőcsoport lehasítása 1,64 g (1,5 mmól) Boc-Arg-Lys(Pal)-Glu-Val-Tyr-OH x HOAc-t 30 percig 10 ml trifluor-ecetsav és diklór-etán 1:1 arányú keverékével kezelünk, majd a felesleges trifluor-ecetsavat ledesztilláljuk és a terméket metanolból éterrel kicsapatjuk. Kitermelés: 1,63 g Arg-Lys(Pal)-Glu* -Val-Tyr-OH x 2 TFA, az elméleti 93,7%-a. Híg sósavból való liofilizálás után a megfelelő t-Pal•SP5 x 2HCl-t kapjuk. Molekulatömeg: 1005,13. Összegképlet: C47H83N9014Cl2. Rf = 0,66 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével). A kapott vegyületet 1 n nátrium-hidroxiddal titráljuk, a sót eltávolítjuk és liofilizáljuk. így a szabad peptidet, az N£ MPAl-SP5-t kapjuk. Molekulatömeg: 932,2. Összegképlet: C47H8iN9O10. Rf = 0,66 (N-butanol:jégecet:etil-acetát:víz 1:1:1:1 arányú keverékével). 3. példa (N^-Acetil-arginiD-lizil-glutamil-valil-tirozin -(a-MAcetil-SP5) előállítása 3.1 Acilezés 1,16 g (1 mmól) Arg(N02)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Tyr-OBzl x TFA-t 5 ml dimetil-formamidban oldunk és 180 mikroliter N-metil-morfolin (vagy más tercier-amin) hozzáadása után 0,265 g (1,2 mmól) N-acetoxi-norborn-5* -én-2,3-dikarnboximiddel reagáltatjuk. 30 perc után a reakcióelegyet keverés közben normál sósavba öntjük, a csapadékot leszűijük és vízzel mossuk. A terméket mintegy 10 ml dimet- U-formamidban oldjuk és 5%-os NaHCOs-oldattal kicsapatjuk. A csapadékot szüljük és vízzel mossuk. Metanol/éterből átkristályosítjuk és így 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
