199878. lajstromszámú szabadalom • Eljárás acilezett splenopentinek és a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199878 B 2 zegben alkalmazható. Elsősorban az aminocsoportokkal szembeni nagy reakcióképessége miatt bázis hozzáadása nélkül is rendkívül rövid idő alatt reagál. A reakció során keletkező N-hidroxi-norborn-5-én-2,3-dikarboxamid könnyen elválasztható és nem toxikus, így alkalmazása mindenekelőtt a gyógyszeriparban különösen előnyös. Ezekkel az acilezőszerekkel a mono- és a diacil-vegyületeket jó kitermeléssel (az elméleti 90%-a), nemkívánatos mellékreakciók nélkül állíthatjuk elő. Ha az acilezést tercier-aminok jelenlétében végezzük, a megfelelő triacil-vegyületeket kapjuk. A kapott acilezett splenopentinek tisztítását különösen előnyösen kromatográfiásan végezzük karboxilezett kationcserélőkön, vizes eluálórendszerekben 10‘2 és 10‘5 mól/1 közötti ionerősségnél. Hordozóanyagként előnyösen akrilsav/divinil-benzoi kopolimereket alkalmazunk. Az ioncserélő kromatográfiánál szokásos magas hordozó kapacitás esetén (5 — 10 mg peptid/ml oszloptérfogat) a találmány szerint az eluálást izokratikusan, vizes eluálószerekkel végezzük, a 10'2 és 1Ü"5 mól/! közötti szükséges ionerősséget savak hozzáadásával érjük el. A triacetil-(Na-Arg, N£-Lys, 0-Tyr)-splenopentin, triacetil-(Na-Arg, bP-Arg, Nl-Lys)-splenopentin, diacetil-(Na-Arg, Ne-Lys)-splenopentin, mono-(Na-Arg)-splenopenlin, mono(Nt-Lys)-splennopentin, valamint D-Tyr-diacetil-(Na-Arg, N£-Lys)-splenopentin és L-Tyr-Diaceti!-(Na-Arg, Né-Lys)-splenopentin-enantiomerek meglepő módon növekvő K’-értékkel eluálhatók és ezáltal polaritásuknak megfelelően elválaszthatók. Valamennyi elválasztott pepiidnél a reprodukálhatóság! ráta nagyobb, mint 95%. Különösen jó elválasztható hatást érünk el, ha olyan eluálószert alkalmazunk, amely 10-20% etanolt tartalmaz. Az eluálórendszerben a kis ionerősség miatt a peptideket a megfelelő frakciók besűrítésével és ezután a következő liofilizálásával egyszerűen és kíméletesen, analitikus RP-HPLC-vel meghatározott 98%-osnál nagyobb tisztaságban lehet izolálni. Az egyéb eljárásoknál szükséges kiegészítő sótalanítási lépések itt elmaradnak. A találmány szerinti eljárás további előnye, hogy nem költséges kromatográfiás hordozóanyagokat alkalmaz, valamint az, hogy a hordozóanyag igen sokszor újra felhasználható (több, mint 100 kromatográfiás ciklusban). Ha az így kapott új vegyületeket gyógyszerészeti célra alkalmas vivőanyaggal és/vagy gyógyszerészeti segédanyaggal keverjük össze, adagolásra alkalmas gyógyszerkészítményeket állíthatunk elő. A splenopentin acilezésével elérjük azt a célt, hogy az enzimes lebontási stabilitást növeljük és ezáltal javítsuk a hatóanyag biológiai felhasználhatóságát. Az immunológiai hatások kimutatására a következő modelleket alkalmazzuk: '-T4-antigének mennyiségi növekedése emberi T-limfociták felületén szisztémás lupus eritematodes (SLE) betegeknél in vitro (8. példa, 1. táblázat.) és- antitestképződés juh eritrocitákkal szemben (vérlemezke-képző lépsejtek) AB/Bln-egerekkel röntgen besugárzás után (8. példa, 2. táblázat). A találmány szerint előállított acilezett splenopentineknek (Aci!-SP5) további farmakológiái tulajdonságaik is vannak, elsősorban azok, amelyek az immunrendszer normalizálásával kapcsolatosak. Ezért lehet felhasznállni őket a következő orvosi indikációknál: — Vírusos infekciók kezelése (13. példa, 3.1- -3.3. táblázat). Az Acil-SP5 alkalmas szernek bizonyult influenza vírusok ellen vagy pankreatitisz kezelésére a Coxsacki-vírussal történt fertőzés után. A vírussal szembeni immun védekezés stimulálásának mértékére megállapítottuk, hogy olyan vírusmennyiségek adagolása esetén, amelyek közepes erősségű fertőzéshez vezetnek, a betegség teljesen megakadályozható, másrészről azonos súlyosságú betegség kiváltásához szükséges vírusdózis a kezelés alatt mintegy 10-szer magasabb, mint a kezelés nélküli egyedeknél. — Kemoterápia utáni kezelés (14. példa, 4.1. ábra, 4.1. táblázat). A szer alkalmas kemoterápiás kezelés utáni immunszupresszív állapot legyőzésére, például a rák kezelésénél vagy túladagolt ciklosporin terápia esetén. Egerek ciklofoszfamid vagy dexametazon kezelése után a Immorális immunválasz normalizálása Acil-SP5 adagolásával elérhető. Az Acil- SP5-nek azonban nincsen hatása a normális antigén-specifikus Immorális immunválasz kialakulására, így a hátrányos immunmoduláló mellékhatásokkal nem kell számolni (4.1. ábra). Az Acil-SP5 származékok elősegítik az immunszupresszív terápia következtében szekunder immunhiánnyal rendelkező pácienseknél az immunrendszer gyorsított helyreállását (4.1. táblázat).- Csontvelősejtek növekedésének és érésének stimulálása (15. példa, 5.1 —5.2. táblázat, 5.1 ábra). A találmány szerint előállított vegyületek in vitro alkalmazása az egér csontvelősejtekből származó törzskolóniák kialakulási sebességét növeli, ha azokat normál személyekből származó vagy SLE-pácienM-kből származó leukocitákkal együtt agarban tenyésztjük. Az a tény, hogy az Acii-SP5 jelenlétében a kolóniák keletkezése megszaporodik, arra enged következtetni, hogy az Acil-SP5-tel közvetlenül a csontvelő éretlen törzssejtjeinek a proliferációja segíthető elő és/vagy az emberi leukociták az Acil-SP5 befolyása alatt koloniaképző faktorokat választanak ki (5.1. táblázat). Egereknél szubletális besugárzás és csontvelőátültetés után a huniorális immunválasz gyorsított helyreállása figyelhető meg (5.1. ábra). A hatóanyagok alkalmazhatók immunszupresszív, illetve citosztatikus terápiánál, besugárzás után és csontvelőátültetés után. Azáltal hatnak, hogy specifikus képződési helyeik (receptoraik) vannak az emberi csontvelősejteken (külö-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
