199877. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ANF-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199877 B 2 A találmány szerinti vegyülctek számos a szakember előtt ismert eljárással előállíthatók. Ilyen eljárás az oltalmazni kívánt szilárdfázisú szekvenciális és blokk szintézis. A szilárdfázisú szekvenciális eljárást automatikus peptid szintetizátor alalmazásával hajthatjuk végre. Ebben az eljárásban az aminocsoporton védett aminosavat a karboxil-végcsoportja révén a gyantához kötjük, ezután az aminosavról a peptid kötés létrehozására kijelölt aminocsoporton védőcsoportot eltávolítjuk és a kívánt szekvencia következő aminocsoporton védett aminosav egységét hozzákapcsoljuk egy peptid kötés létrehozásával. A védőcsoport eltávolítást és a kapcsolást addig ismételjük, amíg a kívánt polipeptidet nem kapjuk termékül. Az ilyen eljárással szintetizált találmány szerinti vegyületeket karboxil-csoportot tartalmazó végegységüktől kiindulva az aminocsoportot tartalmazó végegységük felé haladva állítjuk elő. Az aminocsoporton védett aminosav lehet egy szokásos aminosav, ennek származéka vagy izomerje, vagy egy távtartó csoport. Az alkalmazott gyanta hordozó lehet egy a szakirodalomban szilárdfázisú polipeptid szintézisben alkalmazott gyanta. Előnyösen alkalmazható gyanta a polisztirol gyanta, amely körülbelül 0,5 — körülbelül 3% keresztkötésű divinil-benzolt tartalmaz, amelyet benzhidril-amidáltak, klór-metileztek vagy hidroximetileztek és így amid vagy észter képzésre alkalmas aktív helyeket hoztak létre rajta, amelyek alkalmasak az első, aminocsoporton védett arainosawal történő kötésre. Egy ilyen hidroximetil-gyantát írt le Bodansky csoportja (Chem. Ind. /London/ 38, 1597-98 /1966/). Klórmetilezett és benzhidril-amid gyanták előállítását írta le Stewart csoportja ("Solid Phase Peptide Synthesis", 2nd Edition, Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois /1984/, Chapter 2, pp, 54—55). A peptid karboxil-terminális aminocsoporton védett aminosav egységét a gyantához a szokásosan alkalmazott standard eljárásokkal kapcsolhatjuk. Például az aminocsoporton védett aminosavat a gyantához kapcsolhatjuk Gisin eljárása szerint (Helv. Chem. Acta, 56, 1476 /1973/). Amennyiben kívánatosán benzhidril-amin egységet tartalmazó gyantát alkalma-. zunk az aminocsoporton védett aminosav egység alfa-karbonsav egysége és a gyanta aminocsoportja között létrejövő amidkötéssel van a gyantához kötve. Ezt a kötést a standard kapcsolási, alább közölt eljárásokkal hozhatjuk létre. Számos gyantához kötött aminosav kereskedelemben is kapható. A polipeptid szekvenciába beépített egyes aminosavak alfa-aminocsoportján alkalmazott védőcsoport bármely a szakirodalomban ismert védőcsoport lehet. Az alkalmazható aminocsoport védőcsoport osztályok lehetnek: (1) acilcsoport típusú védőcsoportok, mint például formilcsoport, trifluor-acetil-csoport, ftalil-csoport, p-toluol-szulfonil-csoport (tozilcsoport), benzol-szulfonil-csoport, nitro-fenil-szulfenil-csoport, tritil-szulfenil-csoport, o-nitro-fenoxi-acetil-csoport és alfa-klór-butiril-csoport; (2) aromás uretán típusú védőcsoportok, mint például benziloxi-karbonil-csoport és szubsztituált benziloxi-karbonil-csoportok, mint például p-klór-benziloxi-karbonil-csoport, p-metoxi-benziloxi-karbonil-csoport, p-nitro-benziloxi-karbonil-csoport, p-bróm-benziloxi-karbonil-csoport, l-(p-bifenil)-l-metil-etoxi-karbonil-csoport, alfa.alfa-dimetil-3,5-dimetoxi-benziloxi-karbonil-csoport és benzhidriloxi-karbonil-csoport; (3) alifás -uretán típusú védőcsoportok, mint például t-butoxi-karbonil-csoport (Boc), diizopropil-metoxi-karbonil-csoport, izopropiloxi-karbonil-csoport, etoxi-karbonil-csoport és alliloxi-karbonil-csoport; (4) cikloalkil uretán típusú védőcsoportok, mint például ciklopentiloxi-karbonil-csoport, adamantiloxi-karbonil-csoport és ciklohexiloxi-karbonil-csoport; (5) tiouretán típusú védőcsoportok, mint például feniltio-karbonil-csoport; (6) alkil-típusú védőcsoportok, mint például trifenil-metil-csoport (tritil-csoport) és benzilcsoport (Bzl); (7) trialkil-szilil védőcsoportok, mint például trimetil-szilil-csoport. Előnyösen alkalmazható alfa-aminocsoport védőcsoport a t-butoxi-karbonil-csoport (Boc). A Boc csoport mint alfa-aminocsoport védőcsoport alkalmazását Bodanski és munkatársai a "The Practice of Peptide Synthesis", Springer-Verlag, Berlin /1984/ p. 20 közleményükben leírták. Az aminocsoporton védett aminosav gyantához való kötése után az alfa-aminocsoport védőcsoportot megfelelő eljárás alkalmazásával eltávolítjuk. Ilyen eljárás lehet például trifluor-ecetsav, trifluor-ecetsav és diklórmetán elegye, vagy sósavas dioxán alkalmazása. A védőcsoport eltávolítását körülbelül 0 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten végezzük. Más standard hasítási reakciók is alkalmazhatók speciális aminocsoport védőcsoportok eltávolítására a szakirodalomban ismert módszereknek megfelelően. Miután az alfa-aminocsoport védőcsoportot eltávolítottuk a következő aminocsoporton védett aminosavat kapcsoljuk a molekulához peptid kötés kialakításán keresztül. Ezt a védőcso-port eltávolítást és kapcsolási reakciósort addig ismételjük, amíg a kívánt szekvenciájú polipeptidet nem kapjuk termékként. Más eljárás szerint több aminosavból álló csoportokat kapcsolhatunk össze oldatbani eljárással mielőtt azokat a gyantára felvitt aminosav szekvenciához kapcsoljuk. A megfelelő kapcsoló reagensek kiválasztása a szakember számára ismert. Különösen alkalmas kapcsoló reagensek, amennyiben Gin, Asn vagy Arg aminosavakat kívánunk kapcsolni az N,N-diciklohexil-karbodiimid és az 1-hidroxi-benzotriazol. Ezen reagensek alkalmazása kiküszöböli a nitril és a laktám képződést. Más alkalmazható kapcsoló reagensek (1) a karbodiimidek (például az N,N-diciklohexil-karbodiimid, és az N-etil-N’-(gamma-/dimetil-amino/-propil)-karbodiimid); (2) a ciánamidok (például az N,N-dibenzil-ciánamid); (3) a keténiminek; (4) az izoxazólium sók (például az N-etil-5-fenil-izoxazólium-3- •szulfonát); (5) monociklusos nitrogéntartalmú heterociklusos amidok, amelyek aromás jellegű5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
