199873. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vankomicin típusú antibiotikumok kinyerésére
1 HU 199873 B 2 Az A82846C antibiotikumot tartalmazó frakciókat Gilson 201C automata frakciógyűjtővel gyűjtjük össze. A gradienst Millipore Waters M600 Gradient HPLC rendszerrel hozzuk létre, az injektáláshoz Hitachi automata mintavevőt használunk. Az A82846C komponenst tartalmazó egyesített frakciókat 30 ml térfogatra pároljuk, és 50 ml HP-20 gyantával készített oszlopra visszük. Az oszlopot vízzel mossuk, és 0,5% ecetsavat tartalmazó víz/izonropanol, 95:5 eleggyel eluáljuk, 25 ml-es frakciókat gyűjtve. Az A82846C komponenst tartalmazó frakciókat (9—14. frakciók) egyesítjük, betöményítjük és fagyasztva szárítjuk, 37 mg tisztított A82846C antibiotikumhoz jutva. Az egyes A82846 komponensek jellemző adatai: 1) A82846A molekulasúly: 1556 tapasztalati képlet: C73H89Ni0O26C1 FAB-tömegspektrum (tioglicerin), (M +1) mért: 1557,5803, számított: 1557,5716 UV (víz) Amax “ 281 nm (t - 5052); bázissal eltolódik 300 nm-re. IR (KBr): 1716,1655,1611, 1586,1552,1504, 1410,1340,1310,1230,1212,1132,1066,1028 és 1015 cm'1. pKa (víz) = 4,7 és 9,5. (66% dimetil-formamid) » 5,5; 6,8; 7,9; 9,4; 12,3. (látszólagos mólsúly: 1542).. 2) A82846B molekulasúly: 1590 tapasztalati képlet: C73Hg8N10O26Cl2 FAB-tömegspektrum (tioglicerin), (M +1) mért: 1591,5315, számított: 1591,5327. UV (víz) Amax=> 280 nm(<- 5192), bázissal eltolódúc 300 nm-re. IR (KBr): 1656, 1586, 1662, 1504, 1403, 1264, 1230,1135,1105,1065,1023 és 1018 cm'1. pKa (víz): 4,65 és 9,5. 3) A82846C molekulasúly: 1522 tapasztalati képlet: CtsH^NjoOjö FAB-tömegspektrum (tioglicerin) M + Na), mért: 1545,5998, számított (CTîHÿoNjoO^Na): 1545,5925. UV (víz) Amw- 280 nm (t - 5198), bázissal eltolódik 300 nm-re. IR (KBr): 3600- -3004 (széles), 2999, 2991, 2950, 1687--1650 (széles, 1585, 1570, 1509, 5 1503, 1453, 1449. 1402, 1212, 1130, 1102, 1060, 1032 és 1014 cm1. pKa(víz): 4,6 és 9,4. Az A82846A, A82846B és A82846C 6n sósavban készült hidrolizátumának aminosavanalízise 10 aszparaginsavat jelez, és két széles csúcs jelenik meg nyomnyi glicinnel. A két csúcs megfelel az aktinoidin és a vankomicin aminosavaknak; mindkettő jelen van a vankomicin típusú glikopeptidekben. 15 Az összehasonlító NMR vizsgálatok azt mutatják, hogy az A82846A, A82846B és az A82846C mindegyike tartalmaz egy új aminocukrot, a 4-epi-vankozamint (3-metil-akozamin). Az A82846A tapasztalati képletét megkapjuk, 20 ha a vankomicinból (Q6H75N9O24CI2) elveszünk egy klóratomot és hozzáadjuk a vankózamin típusú aminocukor elemeit (C7H14N02). Az A82846B tapasztalati képlete megfelel az A82846A képletének, azzal a különbséggel, hogy 25 annak egyik hidrogénatomját klóratom helyettesíti. Az A82846C képlete megfelel az A82846A képletének, azzal a különbséggel, hogy annak klóratomját hidrogénatom helyettesíti. Ezek értelmében az A82846 komponensek a glikopepti- 30 dek új csoportját alkotják, melyek kétségtelenül hasonlítanak a vankomicin molekulához, de eltérnek tőle a klórtartalmat és egy vankózamin alegységet illetően. Az A82846 antibiotikumok in vivo antimikro- 35 biális hatást mutatnak a kísérleti állatokban kísérleti úton kiváltott fertőzésekkel szemben. Két dózis vizsgálandó anyagot adva be kísérleti úton fertőzött egereknek, meghatározzuk az ED50 értéket [a kísérleti állatok 50%-át megvédő meny- 40 nyiség mg/testsúlykilogramm érdekében kifejezve; Warren Wick és munkatársai, J. Bacteriol., 81: 233 - 235 (1961)]. A kapott ED50 értékeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze. 45 Az A82846 antibiótikum in vivo aktivitása Vegyület Staphylococcus aureus ED50 értékek* Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae A82846A 0,19 0,19 0,17 A82846B 0,19 0,20 0,18 A82846C 2,18 2,71 5,87 Vankomicin 1,30 0,72 1,52 i mg/lcg értékben megadott dózis az egérnek szubkután beadva a fertőzés utáni 1. és 4. órában. 6
