199870. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusellenes hatású purin-arabinozid származékok és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199870 B 2 A hatóanyagot a glikofuroloan oldjuk, ekkor hozzáadjuk a benzil-alkoholt és oldjuk, valamint a vizet 3 ml térfogatra. A keveréket ekkor steril mikropórusos szűrőn szűrjük és steril 3 ml-es sárga üvegfiolába töltjük (1. típus). 51. példa Szirup szuszpenzió Hatóanyag 0,2500 g Szorbitol oldat 1,5000 g Gliccrol 2,000 g Diszpergálható cellulóz Illatanyag: barack 0,0750 g 17.42.3169 0,0125 ml Tisztított víz 5 ml-ig A nátrium-benzoátot a tisztított víz egy részében oldjuk és hozzáadjuk a szorbitol oldatot, majd a hatóanyagot és diszpergáljuk. A glicerolban diszpergáljuk a sűrítőanyagot (a diszpergálható cellulózt). A két diszperziót összekeverjük és a kívánt térfogatra tisztított vízzel kiegészítjük. A szuszpenzió további nyírása révén további sűrítést lehet elérni. 52. példa Kúpok mg/kúp Hatóanyag (63 mikrométer)* 250 Kemény zsír, BP (Witepsol H15 — Dynamit Nobel terméke) 1700 1950 * - A hatóanyagot porként használjuk, a részecskék legalább 90%-a 63 mikrométer átmérőjű vagy annál kisebb. A Witepsol H15 egyötöd részét gőzköpennyel ellátott edényben legfeljebb 45 °C-on megolvasztjuk. A hatóanyagot egy 200 mikrométeres szitán keresztül szitáljuk és az olvasztott bázishoz adjuk keverés közben vágófejjel ellátott kévéről alkalmazva. így finom diszperziót készítünk. A keveréket 45 °C-on tartva hozzáadjuk a szuszpenzióhoz a maradék Witepsol H15-öt és homogén elegy eléréséig keverjük. A teljes szuszpenziót átnyomjuk egy 250 mikrométeres rozsdamentes acélszűrőn és folyamatos keverés közben 40 °C-ra hűtjük. 38 és 40 °C közötti hőmérsékleten a keverékből 2,02 g-ot alkalmas műanyagformákba töltünk. A kúpokat szobahőmérsékletre hűljük. 53 53, példa Pesszáriumok_________________mg/pesszárium Hatóanyag, 63 mikrométeres 250 Dextróz-anhidrát 380 Burgonyakeményítő 363 Magnézium-sztearát 7 1000 A fenti alkotórészeket közvetlenül összekeverjük és a kapott elegy közvetlen kompressziójával készítjük a pesszáriumokat. Farmakológia! vizsgálatok Antivirális toxicités és asszimilálhatóság meghatározása Anti-Varicella zoster vírus aktivitás meghatározása A vegyületeknek a VZV (Okas törzs) replikációjára gyakorolt inhibitor hatását a következőképpen módosított ELISA eljárással állapítjuk meg (F.E. Berkowitz és M J. Levin: Antimicrob. Agents and Chemother. 28, 207 - 210 /k875/): Az infekciót a hatóanyag jelenlétében végezzük, nem a hatóanyag adagolása előtt. A hatóanyagot és a vírist a nem fertőzött sejtekkel (humán diploid fibroblaszt, MRC —5 törzs) három napig inkubáljuk, majd a 96-vizsgálati (plaque) lapot 5 percig 200 x g-vel centrifugáljuk, hogy ülepítsük az elkülönített sejteket a glutár-aldehides rögzítést megelőzően. Ez az ELISA második antitestként alkáli-foszfatázhoz kapcsolódó antihumán IgG-t alkalmaz. A p-nitro-fenil-foszfát kötött alkáli-foszfatáz általi hasítási sebességét más helyen ismertetett módszerrel állapítjuk meg (S.M. Tadepalli, R.P. Quinn és D. R. Averett: Antimicrob. Agents and Chemother, 29, 93-98 /1986/). A nem fertőzött sejteket használjuk az összehasonlító reakciósebességek meghatározására, amelyeket kivonunk a vírus jelenlétében kapott sebességekből. Ezzel a kísérlettel leszármaztatott vírus detektálása olyan kultúrákban lehetséges, amelyek eredetileg egyenként 15 — 3600 infakciós részecskével voltak fertőzve. Nem fertőzött emlős sejt növekedési inhibfciójának meghatározása A vizsgált vegyületek D 98 sejtek (humán) és L sejtek (patkány) növekedésének gátlására gyakorolt képességét úgy határozzuk, hogy egy adott számú sejtet különböző hígítású vegyületekkel három napig együtt tartunk, majd meghatározzuk a sejtek számát (J. L. Rideout, T.A. Krenitsky, G. W. Koszalka, N. K. Cohn, E. Y. Chao, G. B. Elion, V. S. Latter és R. B. Williams: J. Med. Chem., 25, 1040-1044 /1982/). Ezt a sejtszámot összehasonlítjuk a vegyületek nélkül kapott sejtszámmal. A sejtszámlálást végezhetjük a monolayer tripszines kezelését követő közvetlen részecskeszámlálással, vagy a sejtek által felszívott vitális gramm mennyiségének spektrofotometriás meghatározásával. A két módszerrel összehasonlítható eredményeket kapunk. Adatelemzés A kontroll értékek 50%-ban kapott vegyületkoncentrációt (IC50) vagy direkt interpolálással számítjuk a kontroll értékek százalékában felvett vegyületkoncentráció logaritmusa grafikonjából vagy computer program segítségével, amely ugyanezen algoritmus szerint elemzi az adatokat. Ezekhez a számításokhoz a kontroll 20%-a és 80%-a közötti adatokat használjuk fel. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 19
